daxx反义寡核苷酸在全脑缺血-再灌损伤中作用机制探究

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1、Daxx反义寡核苷酸在全脑缺血/再灌损伤中作用机制探究　　摘要：目的检测Daxx反义寡核苷酸在大鼠海马全脑缺血/再灌介导的神经元损伤中作用机制的研究。方法采用SD大鼠四动脉结扎全脑缺血模型，于缺血前连续3d脑室注射Daxx反义寡核苷酸，用免疫印迹方法研究Daxx反义寡核苷酸在大鼠海马全脑缺血/再灌介导的神经元损伤中对Daxx/Ask1信号通路的影响。结果在海马的CA1区，Daxx反义寡核苷酸可以明显抑制脑缺血介导的Daxx的核转位以及Ask1磷酸化的升高。结论缺血前3d连续脑室注射Daxx反义寡核苷酸可以明显抑制Daxx/Ask1介导细胞信号转导通路。关键词：脑缺血/再灌；反义寡核苷酸；D

2、axx；Ask1脑血管疾病是神经系统的常见病，因此研究其发病的分子机制具有极其重要的意义[1]。死亡结构域相关蛋白（deathdomainassociatedprotein，Daxx）在核内作为转录调控子发挥促凋亡作用[2]，在各种凋亡刺激下，Daxx可以从胞核转移到胞浆中，从而启动不同的细胞信号转导通路引起细胞的凋亡。凋亡信号调节激酶1（Apoptosissignal-regulatingkinase31，ASK1）是MAPKKK家族中的一个成员，可以分别激活MKK4/7-JNK和MKK3/6-p38信号通路[3-5]而引起细胞的凋亡。在脑缺血信号转导中ASK1信号级联反应是重要的致凋亡

3、信号通路[6-8]。1资料和方法1.1一般资料雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠，250～300g，清洁级，由徐州医学院实验动物中心和中科院上海实验动物中心提供。1.2SD大鼠脑缺血/再灌模型的建立按本室已建立的大鼠四动脉结扎全脑缺血模型，实验动物有机分为假手术组、缺血/再灌组、溶剂对照组和给药组。动物以20%水合氯醛（300～350mg/kg）腹腔注射麻醉后，分离双侧颈总动脉并电凝椎动脉。手术第2d动物于清醒状态下结扎双侧颈总动脉，使全脑缺血15min，然后再灌注不同时间。1.3数据处理数据以均数±标准差（x±s）表示，统计分析采用方差分析（ANOVA），实验组之间比较采用Si

4、gmaStat统计软件，P　　[4]NishitohH.，SaitohM.，MochidaY.，etal.ASK1isessentialforJNK/SAPKactivationbyTRAF2.MolCell，1998，2，389-395.[5]SaitohM.，NishitohH.，FujiiM.，etal.Mammalianthioredoxinisadirectinhibitorofapoptosissignal-regulatingkinase（ASK）1.EmboJ，1998，17，2596-2606.3[6]BaumM.K.，Shor-PosnerG.，LaiS.，etal.H

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7、x，anovelFasbindingproteinthatactivatesJNKandapoptosis[J].Cell，1997，89（7）：1067-1076.编辑/王敏3