最新细胞工程课件二--实验室教学讲义ppt.ppt

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1、细胞工程课件二--实验室与植物细胞工程实验室设置上的区别：基本相同；不同---对气体的要求。动物细胞培养的是单细胞。一、动物细胞工程实验室的设置动物细胞工程的实验室要求严格：必须保持无菌的环境、规范的无菌操作过程、严格的外界条件控制。具体将细胞培养的整个过程分为6个方面：无菌操作、培养、制备、清洗、消毒和灭菌、观察和储藏等。无菌操作必须分室处理。培养室：是细胞培养实验中对无菌操作最为严格的一个环节。无菌操作室是相对密封、防尘、防菌的工作间，在结构和消毒方面有其基本要求。应包括更衣间、缓冲间、操作间。细胞学鉴定室

2、（分析室）：对培养物的观察分析和培养物计数等。一般设在培养室的隔壁。对无菌没有无菌操作间严格，但同样需要防尘以及相对无菌的清洁环境。放置显微镜、打印机及其它分析设备等。细胞培养实验室1.准备室2.缓冲室准备室风淋3.培养室动物细胞工程的实验室设置制备存储、观察和培养室清洗、消毒室无菌操作室内外常用的仪器设备:倒置显微镜超净工作台CO2培养箱冰箱细胞计数板离心机细胞冷冻储存器压力蒸汽消毒器电热干燥器箱过滤除菌装置纯水仪超净工作台侧流式(或称垂直式)外流式(或称水平层流式)外流式超净工作台二氧化碳培养箱通过对周围环

3、境条件的控制制造出一个能使细胞/组织更好地生长的环境，条件控制的结果就会形成一个稳定的条件：如恒定的酸碱度（pH值：7.2-7.4）、稳定的温度（37°C）、较高的相对湿度（95％）、稳定的CO2水平（5%）。CO2培养箱使用CO2培养箱培养细胞时应注意的问题：①用螺旋口瓶培养细胞时，需将瓶盖微松，以保证通气。②保持培养箱内空气干净，定期消毒。③箱内水槽中：灭菌蒸馏水3000毫升以保持箱内湿度，避兔培养液蒸发。CO2培养箱倒置显微镜液氮容器电热干燥器箱纯水仪培养用器皿培养器皿：供细胞接种、生长等用的器皿，可由透

4、明度好、无毒的中性硬质玻璃或无毒而透明光滑的特制塑料制成。培养器皿包括各种规格的玻璃、塑料培养瓶，培养皿，吸管，离心管等。培养瓶：由玻璃或塑料制成，主要用于培养、繁殖细胞。国产培养瓶的规格常以容量表示，如：250ml、100ml、25ml等；进口培养瓶则多以底面积（cm2）表示。培养皿：由玻璃或塑料制成，供盛取、分离、处理组织或作细胞毒性、集落形成、单细胞分离、同位素掺入、细胞增殖等实验使用。分直径30mm、60mm、120mm等。多孔培养板：可供细胞克隆及细胞毒性等各种检测实验使用。其优点是节约样本及试剂，可

5、同时测试大量样本。常用的有：96孔、24孔、12孔、6孔、4孔等。液体储存瓶：主要用于存放或配制各种培养用液体如培养液、血清及试剂等。常用规格有500ml、250ml吸管：常用的有长吸管和短吸管两类，长吸管也称刻度吸管。刻度吸管用于移动液体。常用1ml和10ml两种。短吸管也叫滴管，分弯头和直头两种，除可作吸取、转移液体外，弯头尖吸管还常用于吹打、混匀传代细胞加样器：用于吸取、移动液体或滴加样本。常用微量加样器，可保证实验样品含量精确，重复性良好。离心管：离心管是细胞培养中使用最广泛的器皿，根据用途不同形态各样

6、，常用于细胞培养的离心管有大腹式尖底离心管和普通尖底离心管两类。前者分别为50ml、30ml、15ml；后者则多为10ml和5ml。其它：如三角烧瓶、烧杯、量筒、漏斗、注射器等其它用品尚有放置试剂或临时插置吸管用的试管，装放吸管以便消毒的大玻璃筒，用于存放小件培养物品便于高压消毒的铝饭盒或贮槽，套于吸管顶部的橡皮吸头，封闭各种瓶、管的胶塞、盖子，冻存细胞用的安瓿或冻存管，不同规格的注射器，烧杯和量筒以及漏斗等。器械二、器材的清洗与消毒清洗的主要目的是消除接触细胞的器皿上表面的杂质和微生物等成分。清洗完毕后的器皿

7、在消毒之前必须进行严密包装，以便消毒及存储，防止灰尘及消毒后再次被污染。消毒---严格的消毒，包括器皿和培养基是必须的。超净台和无菌间的大面积消毒主要通过紫外灯；玻璃器皿、滤器、胶塞、解剖用具、塑料枪头等多通过高压蒸汽灭菌；培养基因为其中含有不耐热成分，所以多通过过滤除菌，器皿的入口、移液器、操作者的手套等多为化学消毒。1、玻璃器皿的清洗与消毒浸泡---自来水浸泡、5%盐酸过夜。（细胞培养用过的玻璃瓶要立即浸泡到自来水中，防止干涸）。洗刷---浸泡过的玻璃瓶，用软毛刷在洗衣粉中洗刷，不要留下死角。干燥浸酸：通常

8、用重铬酸钾/浓硫酸/水以12：20：100（g:ml:ml）配制成酸洗液。洗刷过的玻璃器皿在其中浸泡过夜。冲洗：自动洗涤装置冲洗或手工操作倒置于防尘箱中凉干，牛皮纸包装，高压灭菌，50-70℃烘干备用清洁液可根据需要,配制成不同的强度,常用的下列三种:重铬酸钾(g):浓硫酸(ml):蒸馏水(ml)(A)强清洁液63:1000:200(B)次强清洗液120:200:1000(C)弱清洁液