最新第四讲营养缺陷型菌株筛选PPT课件.ppt

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1、第四讲营养缺陷型菌株筛选第三节营养缺陷型菌株的筛选营养缺陷型在生产上和科学研究上用途很大。目前生产氨基酸、核苷酸的菌种都是各种类型的缺陷型。研究代谢途径，育种技术都必须有营养缺陷型的菌株为材料。营养缺陷型的用途一、基本概念二、筛选营养缺陷型的步骤（一）诱变（二）淘汰野生型（三）检出缺陷型（四）确定生长谱（一）诱变方法用于诱发营养缺陷型的诱变剂有：亚硝基胍紫外线亚硝酸1、抗生素法：原理：一般细菌可以采用青霉素，酵母可采用制霉菌素。2、菌丝过滤法：对于霉菌，因孢子生长后会长出菌丝体，就可用滤纸过滤法将菌丝滤去，而缺陷型孢子却因未发芽而不能滤

2、过。3、高温杀菌法：利用芽孢菌类的芽孢和营养体对热敏感性的差异。（二）淘汰野生型MMCMCMMMMMCM加青霉素（三）缺陷型的捡出原理：缺陷型在CM上生长良好，而在MM上则不生长，野生型都能生长。具体方法：影印法、点种法夹层法、限量补充法无营养缺陷MMMM+FCM其他营养缺陷F营养缺陷（1）将一较平皿直径小1cm的金属圆筒蒙上一层灭菌的丝绒，用金属夹夹住，灭菌。（2）完全培养基上长出的全部菌落在丝绒上轻轻一压，使之成为印模，标记方位。（3）将基本培养基平皿和完全培养基平皿在标记的同一方位上先后轻轻一压，此菌印模即复印于上。１、影印法（4

3、）将CM和MM在恒温箱中培养。（5）二平皿相同方位进行比较，即可发现在MM平皿上长出的菌落少于CM平板上的。MM上未长而相应于CM上长出的那几个菌落就可能是缺陷型。此法要求平皿上菌落不能太多，菌落之间应有一定间隔。MMCM２、点种法用接种针或牙签将CM上长出的菌落在MM和CM两副平板上接种，依次在相应位置点种，然后一起培养，观察其生长情况。此法结果明确，但工作量大。CMCMMM３、夹层法先在培养皿上倒一层基本琼脂培养基，凝固后涂上一层含菌的MM，凝固后再倒一薄层MM琼脂培养基，培养24h，将出现的菌落标记，然后倒上一层CM琼脂培养基，再

4、培养。这时第二批长出的菌落就可能是缺陷型。此法缺点是，结果有时不明确，而且将缺陷型菌落从夹层中挑出并不很容易。基本琼脂培养基含菌的MMCM该法有两种情况：（1）目的是捡出营养缺陷型方法是将富集培养后的细胞接种到含有0.01%蛋白胨的MM上培养，野生型迅速长成大菌落，而生长缓慢的小菌落可能是营养缺陷型。（2）目的是定向筛选某种特定的缺陷型在基本培养基中加入某种单一的氨基酸、维生素或碱基等物质。４、限量补充法大　黄RadixetRhizomaRhei（英）Rhubarb2021/8/22【来源】为蓼科植物掌叶大黄RheumpalmatumL

5、.、唐古特大黄RheumtanguticumMaxim.etBalf.或药用大黄RheumofficinaleBaill.的干燥根及根茎。【植物形态】⒈　掌叶大黄　多年生草本，茎高约２米。叶片宽卵形或近圆形，３－７掌状中裂；基生叶互生，较小，具浅褐色膜质托叶鞘。圆锥花序；花小，花被片６，红紫色或带红紫色。瘦果三棱状，具翅。⒉　唐古特大黄　与掌叶大黄的主要区别为叶掌状深裂，裂片披针形，花序分支紧密，常向上紧贴于茎。⒊　药用大黄　与掌叶大黄的主要区别为叶掌状浅裂，一般仅达叶片的1/4处，裂片宽三角形，花较大，白色。2021/8/22大黄植物

6、2021/8/22大黄中药材2021/8/22【产地】掌叶大黄主产于甘肃、青海、四川，产量占大黄的大部分；唐古特大黄主产于青海；药用大黄主产于四川、贵州和云南等地，产量很小，商品中少见。【采制】选择生长３年以上者，秋末或次春发芽前采挖，除去须根，刮去外皮，切瓣或段，绳穿成串干燥或直接干燥。2021/8/22【生药性状】1类圆柱形、圆锥形或不规则块片状。2除尽外皮者表面黄棕色至红棕色，有的可见类白色网状纹理，残留的外皮棕褐色。3质坚实，断面淡红棕色或黄棕色，颗粒性。根茎髓部宽广，有星点（异型维管束）环列或散在；根形成层明显，木部发达，具放

7、射状纹理，无星点。4气清香，味苦微涩，嚼之粘牙，有沙粒感，唾液染成黄色。2021/8/22【显微鉴定】⒈　根横切面：木栓层、皮层多已除去。韧皮部筛管群明显。形成层成环。木质部发达，射线致密，宽２－４列细胞，内含棕色物；导管常１至数个相聚，稀疏排列。薄壁细胞含草酸钙簇晶和淀粉粒。⒉　根茎横切面：髓部宽广，周木式异型维管束散在或成环，形成层成环，射线呈星状射出。⒊　粉末黄棕色。⑴草酸钙簇晶众多，直径20-160μm，有的可达190μm。⑵具缘纹孔、网纹导管较大，也有螺纹或环纹导管，非木化。⑶淀粉粒甚多，单粒类球形或多角形，直径3-45μm，

8、脐点星状；复粒由２-８分粒组成。2021/8/22【化学成分】含蒽醌类衍生物约２－5.2％，其中游离蒽类衍生物占总蒽醌的１０－２０％，主要有大黄酸（Rhein）、大黄素（Emodin）、大黄酚（Chryso