最新穴位敷贴治疗哮喘的机理研究教学讲义PPT.ppt

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1、穴位敷贴治疗哮喘的机理研究1.4实验药物麻黄、细辛、甘遂、延胡、白芥子。各药按比例研成粉末，用时以老姜汁调成糊状，切成0.5cm×0.5cm的方块，并撒以少量麝香。地塞米松注射液、0.9%的生理盐水。1.5造模及分组将40只Hartly豚鼠随机分为4组，每组10只：模型组、致敏加穴位敷贴组（穴位敷贴组）、致敏加地塞米松治疗组（地塞米松组）、对照组。哮喘豚鼠模型的制备采用ItohK报道的卵蛋白吸入法：取豚鼠，先腹腔内注射10%卵蛋白生理盐水1ml，两周后每天用1%的卵蛋白溶液超声喷雾，每次30秒，连续1周，至豚鼠出现

2、烦躁、呛咳、呼吸深快、点头运动及喘息。对照组用生理盐水1ml腹腔注射，2周后用同样方法吸入生理盐水。1.6治疗方法穴位敷贴组于造模成功，哮喘发作次日开始治疗。穴位选择：大椎、肺俞、肾俞。具体方法：将豚鼠颈背部穴位处用脱毛剂（8%的硫代硫酸钠）脱毛3×5cm2面积，用大块胶布将药物敷贴固定于穴位处。每次敷药6小时，隔日治疗一次，共治疗7次。地塞米松组采用腹腔注射地塞米松0.5mg/kg,治疗时间与次数同敷贴组。模型组造模成功后令其自然恢复，正常对照组不给予任何治疗。1.7外周血EOS计数检查采用XF9030自动血液细

3、胞分析仪进行EOS自动计数。哮喘患者气道黏膜活检发现存在EOS及其毒性产物，并与LAR一致。近年的研究发现，骨髓中EOS的持续生成增多是导致慢性气道炎症和气道高反应性的重要原因。大量研究表明：哮喘患者的气道以EOS持续聚集浸润为特征，哮喘发作时患者外周血及气道内EOS均明显增多，而病情缓解时EOS又明显减少。哮喘发作期外周血、BALF液中EOS高于缓解期，而缓解期仍高于正常对照组与激素治疗后。动物实验也得到相同结果。高晓明等进一步研究发现哮喘患者痰EOS计数与症状分级呈显著正相关，与肺功能（FEV1）呈显著负相关。

4、刘学等检测发现血液中EOS的数量与气道高反应性呈显著正相关，同时还与血清IgE水平呈正相关。综上所述，EOS主导迟发相哮喘反应（LAR）、是哮喘慢性气道变应性炎症的中心细胞，即使在缓解期仍高于正常人。这与中医关于哮喘内伏“宿根”的理论不谋而合，EOS浸润可能是哮喘“宿根”的微观基础之一。穴位敷帖对哮喘豚鼠外周血及支气管肺组织EOS浸润的影响本研究结果显示，模型组豚鼠外周血、支气管肺泡组织EOS明显升高，与正常对照组比较差异有显著性（P<0.01），表明造模是成功的,也再次证明了EOS与哮喘发病密切相关。经过中药敷贴

5、“大椎”、“肺俞”、“肾俞”治疗或注射地塞米松，哮喘豚鼠外周血及支气管肺泡组织明显低于模型组（P<0.01），但仍高于正常组，表明穴位敷贴与地塞米松均能降低外周血EOS水平及支气管肺组织EOS浸润程度，具有确切的抗EOS炎症的作用。实验二穴位敷贴对哮喘豚鼠支气管上皮超微结构的影响1．材料与方法1.1主要试剂及仪器含有2.5%戊二醛与4%多聚甲醛的固定液、0.1MPBS、1%锇酸、不同浓度的乙醇、丙酮，EPON812。AO超薄切片机、JEM-1200X型透射电镜1.2实验动物、药物、造模及分组、治疗等均同实验一。1．

6、3支气管超微结构检查1．4结果判断透射电镜主要观察支气管上皮细胞结构及其炎症改变，EOS浸润及脱颗粒情况。2．结果电镜超微结构观察显示，正常组豚鼠支气管上皮主要由柱状上皮细胞（包括假复层纤毛柱状上皮细胞和无纤毛柱状细胞）、杯状细胞、紧贴基底膜的基底细胞组成,其中以纤毛柱状细胞为主。纤毛细胞表面有大量纤毛和微绒毛，线粒体位于细胞顶端，胞核形态不规则，位于细胞的基底部；无纤毛柱状细胞表面亦有少量微绒毛；在柱状上皮细胞之间散在着可分泌黏液的杯状细胞，为单细胞黏

7、液腺，细胞顶部胞浆中有大量高尔基器并饱含黏液原颗粒。基底膜薄而连续，基底膜下可见胶原纤维。电镜视野下未见白细胞。模型组支气管纤毛破坏，排列紊乱、纤毛内微小管闭塞、纤毛脱落坏死、纤毛稀少；支气管上皮基细胞与表面的柱状细胞之间的细胞间隙增宽，其中有大量嗜酸性粒细胞浸润：EOS胞核为分叶状（多为双叶核，故切片中可见双核），体积较大，核膜和胞膜完整，胞浆中有大量嗜酸性蛋白颗粒<△>，这些蛋白颗粒呈扁平形类结晶样结构，颗粒内含有电子密度较高的长方形结晶体，周围为电子密度较低的基质。部分激活的EOS还可看到脱颗粒后形成

8、的空泡而成为低密度EOS：胞浆内空泡颗粒密度明显增大，颗粒外形也明显改变，而实质颗粒的密度却明显减少，提示低密度EOS已经脱颗粒。治疗组支气管纤毛损伤较模型组明显减轻，纤毛数目较多，排列也较整齐，纤毛闭塞坏死减少；仍可见EOS，但数量较模型组减少。西药组支气管纤毛损伤较模型组明显减轻，纤毛数目较多，排列也较整齐，纤毛闭塞坏死减少；未见EOS，而见少量嗜中性粒