牛磺酸对S180移植瘤小鼠抗氧化作用.doc

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1、牛磺酸对S180移植瘤小鼠抗氧化作用【摘要】 目的观察牛磺酸对S180移植瘤小鼠抗氧化能力的影响。方法60只昆明小鼠随机分为牛磺酸低（A）、中（B)、高(C)剂量组(分别在饮水中添加0.5％，1.0％，1。5％的牛磺酸）,环磷酰胺阳性对照组(D）,肿瘤阴性对照组（E）。各组小鼠左前肢腋窝皮下均接种S180细胞悬液0。2ml。24h后,阳性对照组腹腔注射环磷酰胺20mg/（kg·bw)。1周后处死小鼠，测定血浆、肝组织中超氧化物歧化酶（SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH—Px)的活力、丙二醛（MDA）含量;采用H2O2诱发氧化溶血实验检测红细胞的溶血度；采用单细胞凝胶电泳（SCGE）技术测定

2、血淋巴细胞的DNA断裂情况。结果(1)与阴性对照组比较，牛磺酸各剂量组小鼠血浆中MDA含量降低（P<0.01)，血浆、肝脏的SOD和GSH—Px活力增强(P〈0。05或P<0.01)。（2）牛磺酸低、高剂量组溶血度与阴性对照组比较差异有统计学意义(P〈0.05)。(3)用5,10和25μmol/LH2O2处理血淋巴细胞后,牛磺酸各剂量组的DNA损伤较阴性对照组低，其中10μmol/LH2O2处理的牛磺酸中、高剂量组和25μmol/L，H2O2处理的牛磺酸高剂量组的DNA损伤与阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0。05或P〈0.01）。结论牛磺酸能提高S180移植瘤小鼠的抗氧化能力，可能与提

3、高机体抗氧化酶活力，减少脂质过氧化物含量，保护红细胞膜，拮抗DNA氧化损伤有关.【关键词】 牛磺酸S180移植瘤抗氧化溶血度DNA氧化损伤　　人体内牛磺酸的总量约占体重的0.1%。国内外学者对牛磺酸的研究发现，它不仅是人体的条件性必需营养素，而且具有广泛的生物学效应，是机体的内源性抗损伤物质.目前牛磺酸已经用于肝胆疾病、心血管疾病、糖尿病、白内障治疗等方面〔1〕。为探讨牛磺酸的抗肿瘤作用，2006年10～12月，本实验通过建立S180移植瘤小鼠动物模型,观察牛磺酸对其抗氧化能力影响,并探讨其作用机制。　　1 材料与方法　　1.1 材料 (1）牛磺酸(北京天天维他保健食品有限公司）。（2)种鼠

4、：S180肉瘤种鼠（山东医学科学院药物所）。(3)实验动物及分组：60只健康昆明种断乳小鼠，体重25~45g（青岛市实验动物中心)，许可证号：SCXK（鲁）20030010。本实验室动物房分笼适应性喂养1周后，随机分成5组。A、B、C组为牛磺酸低、中、高剂量组，分别在饮水中添加0.5％，1。0％，1。5％的牛磺酸，D组为环磷酰胺阳性对照组，E组为肿瘤阴性对照组。每组12只，雌雄各半，饲喂基础饲料。各组小鼠平均初始体重差异无统计学意义（F=0。747，P〉0。05）。（4）其他试剂：环磷酰胺（上海华联制药有限公司);正常熔点琼脂糖(MP）、低熔点脂糖(LMP)、细胞培养液RPMI—1640(美

5、国GibcoBRL公司);小牛血清（杭州四季青公司)；淋巴细胞分离液(上海恒信化学试剂有限公司)；荧光剂4，6—联脒-2-苯基吲哚（DAPI，美国BoehringerMannheim公司)；三羟甲基氨基甲烷(Tris,美国Amresco公司);1，6-Diphenyl—1，3,5-hexariene(DPH，美国Sigma公司)；乙二胺四乙酸、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、氢氧化钠等为国产AR级试剂(青岛爱普生物制剂公司);超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH—Px）试剂盒和考马斯亮兰贮备液以及蛋白标准(南京建成生物工程研究所)。文档为个人收集整理，来源于网络　　

6、1。2 实验方法　　1.2.1 动物肿瘤模型的建立 选择腹腔接种S180移植瘤9d后的小鼠，抽取腹腔积液，经生理盐水稀释、计数(台盼蓝检查细胞活性大于95％）后于小鼠左前肢腋窝皮下接种S180细胞悬液0。2ml(细胞浓度为1。0×107／ml)，24h后，阳性对照组小鼠腹腔注射环磷酰胺20mg／(kg·bw).第8d小鼠称重后，眼眶取血待用，剥离肿瘤组织并剖取肝、脾、胸腺称重。　　1.2。2 血浆、肝组织抗氧化物酶类及MDA的测定　　1.2。2。1 肝匀浆的制备 取新鲜肝组织称重后加入适量冰冷生理盐水，在冰浴中制备10％的匀浆。　　1.2。2。2 检测方法 肝蛋白质的测定采用考马斯亮蓝法。血

7、浆和肝匀浆总SOD活性测定用黄嘌呤氧化酶法；MDA含量测定用硫代巴比妥酸比色法;GSH-Px活力测定用二硫代二硝基苯甲酸DTNB比色法;均按试剂盒说明书操作。　　1。2。3 红细胞溶血度的测定 取新鲜抗凝全血80μl，经生理盐水洗涤，离心3次,每次3000r／min离心5min，最后1次10min。去血浆及白细胞层，制成压积红细胞,加生理盐水配制成体积分数为10%的红细胞悬液。将每个样本的红细胞悬液分为A、B