地鳖纤溶蛋白对荷s180和h22小鼠的抑瘤作用研究

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1、地鳖纤溶蛋白对荷S180和H22小鼠的抑瘤作用研究：刘浩,韩雅莉,丁鸿,黎子蔚【摘要】　　目的研究地鳖虫纤溶活性先导蛋白（EFP）对荷S180和H22小鼠肿瘤的抑制作用。方法通过体外实验，构建荷瘤小鼠模型，药物实验分为阳性对照组（环磷酰胺），阴性对照组（生理盐水），药物高浓度组、中浓度组和低浓度组。实体瘤通过瘤重计算抑瘤率，腹水瘤通过细胞浓度计算抑瘤率。结果EFP对S180腹水瘤有较好的抑制率，药剂量为2.90mg/kg的抑制率为69.56%，明显高于环磷酰胺(20mg/kg)的51.75%的抑制率；EFP对S180实体瘤有较好抑制作用，药剂浓度为1.45g/kg

2、时，抑制率为37.48%，高于环磷酰胺(20mg/kg)的35.59%的抑制率，并呈现一定的药物剂量依赖性；药剂浓度为0.73mg/kg时，对H22实体瘤抑瘤率为41%，高于环磷酰胺(20mg/kg)的37%的抑制率。结论EFP对荷S180和H22小鼠肿瘤有较好的抑制作用。【关键词】地鳖虫纤溶活性先导蛋白；S180细胞；H22细胞；抑瘤作用　　TheAntitumourEffectofEupolyphagaFibrinolyricProteinonS180andH22invivo　　LIUHao,HANYali,DINGHong,LIZiicalIndustr

3、y,GuangdongUniversityofTechnology,Guangzhou510006,China;DepartmentofBiology,JieyangCollege,Jieyang522000,China)　　Abstract：ObjectiveToinvestigatetheantitumoreffectofEupolyphagafibrinolyricproteinonS180andH22invivo.MethodsTumor-bearingmousemodelentside),negativecontrolgroup(saline),theh

4、ighconcentrationdruggroup,themiddleconcentrationdrugofgroup,thelooreroror,g/kg,theinhibitionrateide(20mg/kg)(51.75%).EFPhadpreferablyinhibitionagainstS180solidtumors,g/kg,theinhibitionrateide(20mg/kg)(35.59%),andacertaindose-dependent.小鼠，体质量（20±2）g，雌雄各半，由广州中医药大学实验动物中心提供。小鼠肉瘤细胞株（S180），

5、由广东省第二中医院研究所提供；小鼠肝癌H22，由广州生物医药与健康研究所提供。　　1.3试剂RPMI1640培养基,北京赛默飞世尔生物化学制品有限公司；小牛血清,Hyclone，新西兰PERBIOSCIENCE公司；胰蛋白酶，北京鼎国生物技术有限公司；二甲基亚砜（DMSO），美国AMRESCOO公司产品；环磷酰胺（CTX），山西普德药业有限公司。　　2方法　　2.1纤溶活性的测定参照文献［5］的方法,制备纤维蛋白平板,在平板上打孔(直径7.0mm),加入待测样品，对照孔加0.01mol/L20μl缓冲液,置37℃保温至溶圈清晰可辨，约24h,考马斯亮蓝R250染色

6、后，脱色液脱色后观察，测量溶圈两垂直直径,以UK为标准品,检测地鳖纤溶活性蛋白的纤溶活性。以考马斯亮蓝法和蒽酮法测定冻干蛋白中糖含量和蛋白含量。　　2.2S180腹水瘤与实体瘤实验将冻存S180肿瘤细胞于37℃1min内复苏，1000r/min离心5min，去上清，以RPMI1640含15%小牛血清培养液培养细胞生长至对数期，1000r/min离心5min，适量生理盐水稀释瘤细胞悬液,细胞数为107/ml,取3只正常小鼠，每鼠腹腔注入0.2ml腹水瘤细胞悬液,制备恶性腹水瘤小鼠模型。10d后，选取生长良好的S180荷瘤小鼠(腹水型),无菌条件下抽取腹水，以生理盐水

7、1∶1稀释制成瘤细胞悬液，每鼠腹腔注入0.2ml使之形成腹水型荷瘤状态；将另40只小鼠,每鼠左侧腋窝皮下接种0.2ml瘤细胞悬液（约含瘤细胞106),使之形成恶性实体瘤荷瘤状态，每日观察记录。　　接种翌日小鼠腹腔注射药物，将40只S180腹水瘤小鼠随机分5组（8只/组），阳性对照组注射20mg/kg环磷酰胺，阴性对照注射0.2ml生理盐水、药物高剂量组注射1.45mg/kg，中剂量组注射0.725mg/kg，低剂量组注射0.363mg/kg（EFP药物剂量均参照本室EFP治疗S180荷瘤小鼠的最佳剂量），均为1次/d，连续8d。同样，接种实体瘤24h后对小鼠进行腹

8、腔注射药物