最新病毒感染的诊断与防治教学讲义PPT.ppt

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1、病毒感染的诊断与防治常用的病毒学诊断方法包括：病毒的分离鉴定病毒的血清学检查病毒蛋白和核酸的检测第一节病毒感染的诊断一、标本的采取与送检应注意下列原则：1.对本身带有杂菌(如咽拭子、粪便)或易受污染的标本，要进行病毒分离培养时，应使用抗生素。2.因病毒在室温中易失去活性，标本应低温保存并尽快送检。3.血清学诊断标本的采取应在发病初期和病后2～3w内各取1份血清，以便对比双份血清抗体效价的动态变化。3.组织培养法(tissueculture)或细胞培养(cellculture)法是将离体活组织块或分散的组织细胞加以培养的技术总称，为病毒分离鉴

2、定中的最常用的基本方法。细胞的变化有些病毒在细胞内增殖时可引起特有的细胞病变，称为细胞病变效应(CPE)。常见的变化有细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落等。有些病毒如麻疹病毒、CMV、RSV等作用于细胞膜，可使邻近的细胞相互融合，形成多核巨细胞或称融合细胞。有些病毒(如狂犬病病毒、麻疹病毒等)可在培养细胞中形成胞浆或核内的包涵体。病毒在培养细胞中增殖的指标病毒培养时出现的CPE2.红细胞吸附(hemadsorption,HAd)流感或副流感病毒等感染细胞后，由于细胞膜上出现了血凝素(haemagglutinin,HA)，具有吸附脊椎动物(豚鼠

3、、鸡、猴等)红细胞的能力，这一现象称红细胞吸附，常用来测定具有HA的粘病毒与副粘病毒的增殖。若有相应的抗血清，则能中和细胞膜上的HA，HAd不再发生，称红细胞吸附抑制试验。3.干扰现象(interference)某些病毒感染细胞时不出现CPE或其他易于测出的变化(如HAd)，但能干扰在其后感染的另一病毒的增殖。如风疹病毒感染Vero细胞时CPE不明显，但它能干扰后感染的埃可病毒(ECHOV)的增殖，从而阻抑后者所特有的CPE。4.细胞代谢的改变病毒感染细胞的结果可使培养液的pH值改变，说明细胞的代谢在病毒感染后发生了变化。这种培养环境的生化

4、改变也可作为判断病毒增殖的指标。(二)病毒的数量与感染性测定1.蚀斑测定是一种检查和准确滴定病毒感染性的方法。将稀释的病毒悬液加入单层细胞培养瓶中。病毒吸附后，再覆盖一层融化的半固体营养琼脂，使病毒在单层细胞培养中有限扩散。结果是每一个有感染性的病毒在单层细胞中可产生一个局限性的感染灶。用活性染料(如中性红)染色，则活细胞着色，受病毒感染而破坏的细胞不着色，形成肉眼可见的蚀斑(plaque)。每个蚀斑是由一个感染性病毒颗粒形成的，称作蚀斑形成单位(plaqueformingunit,PFU)。病毒悬液中的感染性病毒量的滴度可用PFU／ml表

5、示。2.50%组织细胞感染量(TCID50)测定法该方法是测定病毒能使50%的组织培养细胞发生感染的最小量。一般是将病毒悬液作10倍的系列稀释，分别接种细胞，经一定时间后观察CPE、血细胞吸附等指标，以最高稀释度能感染50%细胞的量为终点。最后用统计方法计算出50%组织细胞感染量（50%tissuecultureinfectiousdose,TCID50)。三、病毒感染的血清学诊断原理是用已知病毒抗原来检测病人血清中有无相应抗体，故须待病人感染后体内产生抗体时才能检出。另外，在采取临床标本及病人血清应注意病程，必须采取患者急性期血清与恢复期

6、血清(双份血清)进行血清学试验。若第2次血清抗体滴度比第1次高出4倍以上时，才有诊断意义。1.中和试验(neutralizingtest,NTtest)是病毒在活体内或细胞培养中被特异性抗体中和而失去感染性的一种试验。中和抗体(netralizingantibodies,NTAb)是作用于病毒表面抗原(衣壳或包膜)的抗体，同种不同型病毒间一般无交叉，特异性高，而且抗体在体内维持时间长。中和抗体阳性不一定表示正在感染中，也可能因以前有过隐性感染所致。因此，中和试验适用于人群免疫情况的调查，在临床诊断上较少使用。2.补体结合试验(comple

7、mentfixationtest,CFtest)用已知病毒可溶性(CF)抗原来检测病人血清中相应(CF)抗体。CF抗原是病毒的内部抗原，同种异型间常有交叉，故特异性较中和试验低。但CF抗体出现较早，消失较快，故CF阳性可作为近期感染的指标。3.血凝抑制试验(hemagglutinatiainhibitiontest,HItest)具有HA的病毒能凝集鸡、豚鼠、人等的红细胞，称血凝现象。这种现象能被相应抗体抑制，称HI试验。其原理是相应抗体与病毒结合后，阻抑了病毒表面的HA与红细胞的结合。本试验简易、经济，特异性高，常用于粘病毒及乙型脑炎病毒

8、感染的辅助诊断及流行病学调查，也可鉴定病毒的型与亚型。病毒+鸡RBC=凝集（血凝试验）病毒+特异性抗体+鸡RBC=不凝集（血凝抑制试验）四、病毒感染的快速诊断快速诊断主要是指从