最新指抗原能与相应抗体和或致敏淋巴细胞特异性结合、发生免疫反应的-药学医学精品资料.ppt

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1、最新指抗原能与相应抗体和或致敏淋巴细胞特异性结合、发生免疫反应的-药学医学精品资料抗原分类、结构特征及免疫学性质类别胸腺依赖性抗原（TD-Ag）胸腺非依赖抗原（TI-Ag）定义含T细胞表位、需TH细胞只含B细胞表位、不须TH细参与诱导免疫应答胞参予,即可直接激活B细胞结构特征具有载体表位和抗原性表位多为结构比较简单的大分子缺乏重复出现的同一表位多聚体，具有重复出现的同一抗原表位抗原决定簇：存在于抗原分子表面的能够决定抗原特异性的特殊化学基因，又称表位。抗原特异性取决于抗原决定簇，即由抗原决定簇的种类、性质、数目和空间构型决定。2.抗原决定簇(antigenicde

2、terminant)TD抗原（大分子蛋白质）TI抗原（多糖）3.抗原结合价抗原结合价：是指一个抗原分子上能与相应抗体发生特异性结合的抗原决定簇的总数。两种不同的抗原分子上所具有的相同或相似的抗原决定簇称为共同抗原或共有决定簇，亦称交叉反应性抗原。4.共同抗原抗体的概念：机体受抗原刺激后产生的，并且能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。二、抗体基本概念及其性质IgG的一级结构抗原抗体反应：指抗原与相应杭体之间所发生的特异性结合反应。抗原抗体反应的特点：特异性、可逆性、比例性。特异性：比例性：三、抗原抗体反应抗原的特异性取决于抗原决定簇的数目、性质和空间构型

3、，而抗体的特异性则取决于抗体IgFab段的可变区与相应抗原决定簇的结合能力。Ag过剩带Ab过剩带等价带[Ag]Ag-Ab沉淀量“等价带”现象1:24/81.5:112/84:116/4可逆性：抗原与抗体通过很弱的短矩引力而结合，如范德华引力、静电引力、氢键及疏水性作用等。第二节、酶联免疫吸附试验（ELISA）主要试剂:酶标记的抗体或抗原酶标物：免疫学活性酶对底物的催化活性抗原抗体反应的特异性+酶高效催化反应的专一性一、原理及特点特点：灵敏度高、特异性强、准确性好；酶标记试剂能够较长时间保持稳定；操作简便、对环境没有污染；易与其它技术偶联；衍生出适用范围更广的新方法

4、。二、ELISA常规技术常规使用的ELISA技术主要有：直接ELISA：测抗原间接ELISA：测抗体夹心ELISA：测抗原竞争ELISA：测抗体或抗原及半抗原单位点非竞争ELISA：主要测半抗原1.ELISA直接法基本原理：待检抗原包被固相载体后，结合特异性酶标抗体，加底物显色测定。包被抗原加酶标抗体洗涤加底物和显色洗涤2.间接ELISA基本原理：利用酶标记的抗球蛋白抗体（第二抗体）以检测与固相抗原结合的受检抗体。主要用于对病原体抗体（一般仅适用于检测总抗体或IgG抗体）的检测而进行传染病的诊断（如抗HBc、抗HBe）抗原包被间接ELISA法示意图洗涤加一抗洗涤加

5、酶标二抗洗涤加底物和显色3.夹心ELISA基本原理：样品中抗原与载体上抗体结合，经洗涤加入该抗原的酶标记抗体，洗去未结合的酶标抗体，加底物显色，可定量测定抗原。双抗体夹心法测抗原：应用针对抗原两个不同决定族的两种单抗分别作为固相载体包被和酶标抗体，以检测相应的抗原。此法适用于测定二价或二价以上的大分子抗原。此法适用于多价大分子抗原检测，而不能用于测定半抗原等小分子物质。双抗体夹心ELISA（测抗原）4.竞争ELISA竞争法测抗体：待测抗体和一定量的酶标抗体竞争与固相抗原结合。当抗原材料中的干扰物质不易除去，或不易得到足够的纯化抗原时，可用此法检测特异性抗体。竞争法

6、测抗原：待测抗原和一定量的酶标抗原竞争与固相抗体结合，结果如待测抗原含量越多，与固相抗体结合的酶标抗原就越少，显色越浅，二者呈负相关。ELISA竞争法示意图（测抗原）抗原与抗体反应加抗原抗体复合物至抗原包被载体加酶标抗抗体洗涤加底物显色洗涤5.单位点非竞争ELISA基本原理：将待测半抗原与适度过量固相抗体作用，洗涤后加入已知量的过量酶标半抗原，去除未结合的酶标半抗原，经显色测定，酶活性（颜色深浅）同标准或被测半抗原的浓度成反比。固相抗体加半抗原洗涤加酶标抗体洗涤加底物和显色测定半抗原酶底物本法主要用于半抗原（药物、多肽、激素等）测定。三、放大ELISA技术生物素-

7、亲和素系统酶放大系统使用荧光底物（一）、生物素-酶标亲和素系统（BAS-ELISA）基本原理：通过生物素标记抗体连接免疫反应系统，借助生物素化酶或酶标亲和素引入酶与底物反应系统。BAS-ELISA可用来检测多种抗原抗体系统如细菌、病毒、肿瘤细胞表面抗原等。1.基本概念生物素（biotin，B）：又辅酶R或维生素H，是在动植物中广泛分布的一种生长因子，以辅酶形式参与各种羧化酶反应。其分子量244.31，咪唑酮环是亲合素结合的主要部位，噻唑环侧链戊酸末端羧基是抗体和其他生物大分子结合的唯一结构。亲和素（avidin，A）：又抗生物素蛋白、卵白素或亲和素，是从卵白蛋白中

8、提取的一种