最新微生物试验 抑菌效果预测教学讲义ppt课件.ppt

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1、微生物试验抑菌效果预测前言抗病原体药物抗生素消毒剂防腐剂抗生素不同与化学药物的特点（1 ）作用机理的选择性抑制细胞壁合成、干扰细胞膜、抑制蛋白质合成、抑制核酸合成抗菌效果：抑菌、杀菌和溶菌（ 2 ）对微生物有选择性：青霉素对多种革兰氏阳性细菌都有良好药效，链霉素对多种革兰氏阳性和阴性细菌都有良好药效，对结核杆菌有特殊的疗效；氯霉素、四环素、金霉素、土霉素对G-和G+、立克次氏体、衣原体均有作用，属于广谱型抗生素；放线菌酮、两性霉素B、灰黄霉素对真菌有抑制作用。（ 3 ）一般都在很低浓度下对病原菌就发生作用有效

2、浓度：抑制微生物生长的最低浓度。低强度抗生素：有效浓度≥100 mg/L高强度抗生素：有效浓度≤1 mg/L待测菌种：大肠杆菌（G-），枯草芽孢杆菌（G+）药剂：抗生素类药物——氨苄青霉素、链霉素(50μg/μL)消毒剂和防腐剂——红药水、丙酸材料：LB培养基，移液枪100uL，培养皿20个，小试管32支(20mL)，移液枪（蓝、黄枪头各一盒），滤纸片100个，生理盐水，高压蒸汽灭菌锅，150ml锥形瓶4个，500ml锥形瓶2个，酒精灯，接种环。材料与试剂1、配制培养基：LB固体培养基：蛋白胨10g/L(1g

3、/100mL)牛肉膏5g/L(0.5g/100mL)琼脂6g/L(0.6g/100mL)NaCl10g/L(1g/100mL)调pH7.0~7.2与生理盐水、移液枪置于高压蒸汽，灭菌。2、稀释：（如下表）氨苄青霉素：浓度5ug/mL10ug/mL50ug/mL250ug/mL1250ug/mL水2mL1mL199uL156uL105uL氨苄青霉素1uL1uL1uL4uL15uL实验步骤链霉素：浓度5%10%50%80%100%水152uL180uL75uL120uL0uL红药水8uL70uL75uL30uL1

4、50uL浓度0.08%0.4%2%10%50%水1249uL249uL147uL180uL75uL丙酸1uL1uL3uL20uL75uL浓度4ug/mL20ug/mL100ug/mL500ug/mL2500ug/mL水2mL1mL180uL190uL150uL链霉素1uL1uL2uL10uL40uL红药水：丙酸：实验步骤实验步骤3、混菌：（45℃时）将大肠杆菌、枯草芽孢杆菌接种至培养基并注入培养皿，混匀，自然冷却至凝固。平板个数：20mL/皿*20个4、点样：用移液枪分别移取30uL所选试剂，如下图点样，第一

5、个皿点四种药物的最低浓度，其余四个皿依次按浓度梯度点样，中心滤纸点生理盐水，为空白对照，并重复一皿。（2菌种*2.5皿/1菌*4药品）药1对照药4药3药25、培养：37℃下培养20h，观察。测抑菌圈直径，做直径-药剂浓度对数曲线。6、配置菌悬液：分别取一定量大肠杆菌、枯草芽孢杆菌制作菌悬液。7、配制培养基：LB液体培养基：蛋白胨10g/L(4g/400mL)牛肉膏5g/L(2g/400mL)NaCl10g/L(4g/400mL)调pH7.0~7.2高压蒸汽灭菌。实验步骤比浊法：选取上述实验所得抑菌效果较好的药

6、品、大肠杆菌和枯草芽孢杆菌的菌悬液、LB液体培养基如下表装入30支试管中：按上述方法平行配制3组，其中一组未加药品，用生理盐水补充容积，共30支。实验步骤红药水浓度70ug/mL120ug/mL170ug/mL220ug/mL270ug/mL加入药品量uL3uL6uL8uL11uL13uL加菌悬液uL987uL987uL987uL987uL987uL加生理盐水uL10uL7uL5uL2uL0uL实验步骤9、培养：将1组、2组（未加药品）置于37℃下培养12h，3组置于0℃冰箱中培养12h。10、测量及处理：在

7、600nm下测量各试管吸光度，做OD值—药剂浓度对数曲线。实验结果与分析1、滤纸法测抑菌效果实验分析：氨苄青霉素浓度梯度配置2ug/mL10ug/mL50ug/mL250ug/mL1250ug/mL加入药品量uL1uL1uL1uL4uL15uL加入蒸馏水量uL2mL1mL199uL156uL105uL氨苄青霉素（1×104ug/mL）对细菌的直径-药剂浓度对数曲线数值药物浓度药剂对数浓度大肠杆菌抑菌圈平均直径/mm枯草芽孢杆菌抑菌圈平均直径/mm5ug/mL0.717.5010ug/mL118050ug/mL

8、1.720.50250ug/mL2.423.501250ug/mL3.1270从氨苄青霉素对细菌的直径-药剂浓度对数曲线中可以看出：1、氨苄青霉素对大肠杆菌有抑制作用，但即使其浓度达到1250ug/mL时，抑菌效果相对其他药品仍要弱，经查阅文献，氨苄青霉素的最低抑菌浓度为64ug/mL，由此可见其抑菌效果并不十分显著；2、氨苄青霉素对枯草芽孢杆菌无抑制作用，未出现抑菌圈；3、氨苄青霉素对革兰氏阳性细