最新北科大-微生物培养基的配制及灭菌教学讲义PPT课件.ppt

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1、北科大-微生物培养基的配制及灭菌高氏合成一号培养基是一种用于培养放线菌的合成培养基(definedmedia)。培养基中的可溶性淀粉作为碳源和能源，KNO3作为氮源，K2HPO4、MgSO4和FeSO4作为无机盐（高价阳离子盐需单独灭菌后临用前与含磷酸盐的培养基混匀）。合成培养基必须用蒸馏水高氏合成一号培养基豆芽汁葡萄糖培养基是培养酵母菌及霉菌的一种优良培养基，为半合成培养基(semi-definedmedia)。培养基配方出现的自然pH系指培养基不经酸、碱调节而自然呈现的pH。豆芽汁葡萄糖培养基产葡萄糖氧化酶的微生物大多为霉菌。加入脱氧胆酸

2、钠是为了抑制菌丝的形成以获得不互相粘连的霉菌菌落。加入硫酸链霉素是为了抑制细菌的生长。葡萄糖氧化酶催化葡萄糖会生成葡萄糖酸，pH下降，可以通过CaCO3控制培养基的pH，并形成透明圈。葡萄糖氧化酶催化葡萄糖会生成过氧化氢，可以氧化KI生成I，使淀粉变色，从菌落周围是否出现特异的淀粉蓝色圈可以判断出该菌是否产酶。培养方法——葡萄糖氧化酶土壤霉菌分离：取土壤样品5g，加入95mL的无菌水中，200r·min-1摇床振荡1h。平板筛选培养：采用Fiedure.K.J显色法。将富集培养后的土壤悬液，按不同稀释度（10-2、10-3、10-4）接种于平

3、板筛选培养基，28℃培养3d。斜面培养：挑取平板培养基中蓝色圈较大的菌株接种至斜面培养基，28℃恒温，培养4d后置于4℃冰箱保存备用。摇床培养：接种斜面保存的菌种于发酵培养基，250mL摇瓶50mL装液量，28℃恒温，200r·min-1旋转摇床，培养2d。葡萄糖氧化酶实验材料药品：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、马铃薯、蔗糖、KNO3、K2HPO4、MgSO4•7H2O、FeSO4•7H2O、可溶性淀粉、葡萄糖，(NH4)2HPO4、KH2PO4、CaCO3、KI、脱氧胆酸钠、硫酸链霉素、(NH4)2SO4、K2HPO4、KCl、琼脂等各种培养基

4、的组成成分、0.1％孟加拉红溶液，lmol/LHCl、lmol/LNaOH。高压蒸汽灭菌器、电热恒温干燥箱、紫外线杀菌灯、电炉、天平其它：酒精灯、试管、称量纸、牛角匙、烧杯、量筒、玻棒、pH试纸、玻璃珠、三角瓶、封口膜、无棉塞的空试管、培养皿、各种包装纸、防水纸、绳索、棉花、记号笔、标签等。准备无菌水，去离子水装于250ml三角瓶中，每瓶95ml，放置3-5颗玻璃珠，121℃灭菌30min。实验内容（玻璃器皿的洗涤和包装）1．玻璃器皿的洗涤2．灭菌前玻璃器皿的包装(1)培养皿的包装(2)三角瓶的包装过滤除菌抗生素等不耐热物质需要进行过滤除菌。

5、滤器和容器等一般需要进行高温灭菌。实验内容（液体及固体培养基的配制过程）称量：按照配方正确称取各种原料（除琼脂外）放于有刻度的烧杯中。溶化：在烧杯中加入所需水量，玻棒搅拌，加热溶解。定容：倒入一量筒中，补水至所需体积。调pH值：滴加1mol/LNaOH或1mol/LHCl调至所需pH，用pH试纸对照。—液体培养基配制完成！加琼脂混匀：趁热加入1.5％的琼脂搅匀。——固体培养基配制完成！！如果培养基中某种药品用量太少，可以将其配制成较浓的溶液，然后按比例吸取一定体积溶液，加入至培养基中。固体培养基的配制：可以在配制好的液体培养基中加入适量的琼脂

6、粉，灭菌。未冷却前取出，摇匀。肉膏蛋白胨培养基的配制1．培养基成分：牛肉膏0.5g，蛋白胨1g，NaCl0.5g，琼脂1.5～2g，水100ml。pH7.52．配制方法：（1）分别称取蛋白胨和NaCl的所需量，置于烧杯中，加入所需水量的2/3左右的蒸馏水。用玻棒挑取牛肉膏置于另一小烧杯中，进行称量。然后加入少量蒸馏水于小烧杯中溶解，（也可将小烧杯置于石棉网上适度加热溶解），倒入上述烧杯中，用玻棒搅拌使药品全部溶解。（2）加入所需量的琼脂（液体培养基省略此步骤）（3）用1mol/LNaOH溶液调pH至7.5。（4）将溶液倒入量筒中，补充水量至所

7、需体积。（5）分装、加塞、包扎。（6）高压蒸汽灭菌121℃灭菌20min。高氏合成一号培养基的配制1．培养基成分可溶性淀粉2g，KNO30.1g，K2HPO4·3H2O0.05g，MgSO4·7H2O0.05g，NaCl0.05g，FeSO4·7H2O0.001g，琼脂1.5～2g，水100ml，pH7.52．配制方法（1）称量及溶化量取所需水量的2/3左右加入到烧杯中，置于石棉网上加热至沸。称量可溶性淀粉，置于另一小烧杯中，加入少量冷水，将淀粉调成糊状，然后倒入上述装沸水的烧杯中，继续加热，使淀粉完全融化。分别称量KNO3、NaCl、K2H

8、PO4和依次逐一加入水中溶解。（培养基使用前每100ml培养基加入灭菌的1ml5％MgSO4，1ml0.1％FeSO4溶液。）（2）加入所需量的琼脂（液体培养基省略