最新免疫转印技术(副本)教学讲义ppt.ppt

《最新免疫转印技术(副本)教学讲义ppt.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、免疫转印技术(副本)Westernblot二、原理蛋白质(病毒、细菌蛋白)经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE），根据相对分子量的大小分成区带，然后通过转移电泳将SDS-PAGE上的蛋白质转印到硝酸纤维滤膜上加上相应的标记抗体（如酶标抗体、胶体金标记抗体、荧光抗体、放射性同位素标记抗体），也可先加抗体反应，再加标记的抗抗体，通过对抗体的标记物的检测，以分析特异性抗原蛋白区带。Westernblot三、基本步骤（一）目的蛋白的分离1、经过纯化的目的蛋白直接进入下一步2、未经过纯化的目的蛋白需进行分离a、SDS-PAGE（根据相对分子量）b、等点聚焦电泳（根据pI）Wes

2、ternblotting2、靶蛋白与特异性抗体（一抗）反应将可识别靶蛋白的McAb或PcAb与NC膜一同温育。3、靶蛋白与标记的二抗反应待上步反应结束后，洗涤NC膜，使之与标记的二抗反应，二抗可用放射性同位素、酶、生物素、胶体金等标记。Westernblot4、指示反应根据标记物的不同，可采用放射自显影、底物显色等，在NC膜上显示相应的检测蛋白带Westernblot四、Westernblot中应该注意的问题（一）首先应该确定检测蛋白经SDS和还原剂处理后，其抗原决定簇仍然可与相应的抗体结合。特别是在用单克隆抗体作为第1抗体时应考虑这一点。Westernblot（二）要保证检测

3、所用抗体的特异性，尤其是一抗的特异性更为重要。另外，对一抗和标记体的使用浓度，通常要根据实际情况作适当的调整。Westernblot（三）实验操作过程中，拿取凝胶、滤纸和NC膜的时候，必须戴手套，因为皮肤上的油脂和分泌物会阻止蛋白质从凝胶转移到滤膜上。Westernblot（四）转印时要注意电流的大小，过高的电流产生的热量会在凝胶和NC膜之间形成气泡，从而导致转印的失败。有报道，在转印缓冲液中加入20%的甲醇，虽然降低蛋白质的洗脱效率，但可以提高其与硝酸纤维素结合的能力。或者可以在缓冲液中加入终质量分数为0.1%的SDS,也可以提高转印效率。Westernblot五、应用免疫转

4、印技术是蛋白质组分分析和蛋白多肽相对分子质量分析的主要方法，已广泛用于病毒蛋白和基因表达重组蛋白多肽的分析，是基因工中不可缺少的方法之一WesternblotOverThanks!我所理解的教育技术宁芸宣威市民族中学教育技术概念对AECT’94教育技术概念的理解我在教学中使用教育技术的情况一、教育技术概念教育技术是指利用各种理论及技术，通过对教与学过程及相关资源的设计、开发、利用、管理和评价，实现教育教学优化的理论与实践。当然，教育技术的概念有多个版本，这里应用比较广泛的还是AECT’94定义的。二、我对AECT’94教育技术概念的理解AECT’94将教育技术的研究对象明显

5、表述为关于“学习过程”与“学习资源”的一系列理论与实践问题，改变了以往“教学过程”的提法，体现了现代教学观念从以教为中心转向以学为中心，从传授知识转向发展学生学习能力的重大转变。现在都提倡“教师为主导，学生为主体”的教学理念，打破了以往老师满堂灌的教学模式，使学生真正成为课堂的主体，从而激发学生的探究欲望，让他们能主动、自觉的去学习，真正达到学习的目的。教育技术所涉及的五个方面我在教学中使用教育技术的情况教育技术,第一次看到这些词时,我有些茫然,当知道它们是现代教育的新型技术时,作为一名新教师,而且是年轻的新教师,倍感无知,压力陡增!我在教学中使用教育技术的情况目前的我还主要是

6、运用现代教育技术的前三四阶段成果，如制作ppt课件,flash动画等辅助教学工具，虽然还没能运用高端前沿的现代技术，但就我现在利用上的这些辅助教学工具，我已经深深感受到教育技术带来的众多利处，不仅体现在平常的课堂教学效果，更多的是师生之间的学习观念。作为教师，现代教育技术不仅改变了我们的教学方式，摆脱了传统枯燥的说教比划，更重要的是改变了我们的教育理念。使教师由单纯地讲授者，成为学生学习的指导者。在传统教学中，教师扮演的是一种家长式的讲解者，以教师为中心，忽视学生主体作用的发挥，使学生消极、被动的接受知识。而现代教育技术进入课堂后，教师从单纯的讲授者转变成教学的设计者，学生学习

7、的指导者。使学生在教师的引导、帮助下，利用必要的学习资源，主动地获取知识。转变了学生的地位，促进了学生主体作用的发挥。在传统课堂教学中，只注重知识的传授，忽视能力的培养和全面素质的提高，学生消极被动地听讲，始终处于接受灌输的被动地位。而现代教育媒体走进课堂，以其特有的功能和优势，为学生提供了多样化的外部刺激和丰富的学习资源，也为学习提供了多种参与机会，这样，就可以充分发挥学生的主体作用，使学生主动地学习。从而使学生的全面素质得到提高。当然，任何事物的产生与发展，必然存在着双面性，有利也有弊。