最新免疫胶体金技术..ppt课件.ppt

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1、免疫胶体金技术..胶体金标记技术的相关定义免疫胶体金技术是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种新型的免疫标记技术。胶体金标记实质上是蛋白质等高分子被吸附到胶体金颗粒表面的包被过程。胶体金技术的发展DevelopmentofImmunecolloidalgoldtechnique1939-----雏形Kausche等把烟草花叶病毒吸附到金颗粒上在电子显微镜下观察金离子呈高电子密度。1971------作为标记物应用于免疫组织化学研究Faulk等首先将兔抗沙门菌抗血清与胶体金颗粒结合，用直接免疫细胞化学技术检测沙门菌的表面抗

2、原。1974------实现间接免疫金染色法Romano将胶体金标记到马抗人的IgG上，实现了间接免疫金染色法最近由于原料的精选和制作工艺的改进，已能制备出可用于定量测定的GICA试剂。Roche公司生产的用于急性心肌梗死诊断的肌钙蛋白和肌红蛋白的GICA试剂和匹配的简便测读器CardiacReader，其精密度和准确性均符合定量测定要求。不足：金免疫测定中应用的是单份试剂，难于进行质量控制。即使是同一批生产的试剂，也很难保证每个试剂的同一性。因此金免疫测定一般只能用于定性试验。其定量检测和灵敏度的提高还有赖于新原料和新材料的

3、开发与应用。ColloidalGoldSynthesisSolutioncolorvariesextensivelywithparticlesizeUsuallyadeepred,butalsodarkbrown/purpletolightorange/yellowColloidsizecanbecontrolledbyAu:CitrateratiosAnywherebetween1nm-100nm+CitrateiseasilysubstitutedbyothermoreAu-philicmolecules(i.ethiol

4、s)H2O,100OCH2AuCl4Cit-Cit-Cit-Cit-Turkevich,et.al.DiscussionsFaradaySoc.1951,No.1155-75.ProcedureofColloidalGoldSynthesisAdd100mLof1.0%HAuCl4toa200mLErlenmeyerflaskonastirringhotplate.AddamagneticstirbarandbringthesolutiontoaboilTotheboilingsolution,add1.5mLofa1%sol

5、utionoftrisodiumcitratedihydrate,Na3C6H5O7.2H2OStopheatingwhenadeepredcolorisobtained.Synthesisandpropertiesofdifferentparticlesize胶体金粒径(nm)1%柠檬酸三钠加入量(ml)胶体金特性呈色λmax162橙色518nm24.51.5橙色522nm411红色525nm71.50.7紫红535nmTEMImagesofColloidalAuAverageparticlesize~17nmGoodgol

6、dcolloidsandbad(unstable)goldcolloids.劣质金外形不均一，且非球形，有凝集现象，颗粒间变异系数较大Howaretheantibodiescoupledtothegold?Conjugationofantibodiestogoldparticlesdependsuponthreeseparatebutdependentphenomena:a).ionicattractionbetweenthenegativelychargedgoldandthepositivelychargedprotein

7、b).hydrophobicattractionbetweentheantibodyandthegoldsurfacec).Sulfurbinding(CysteineandMethionine)Strongestbindingsuggestedtobethesulfur"hinge"joiningthethetwoFcregions胶体金颗粒带电情况      抗体和金颗粒的耦联（图出处：IVDTechnology）SAMPLE GOLDCONJUGATIONPROTOCOLAdjustthegoldcolloidtothe

8、properpH;Determinedtheminimumamountofprotein;FinalconjugationPurificationAdjustthegoldcolloidtotheproperpH胶体金与蛋白质的结合成功与否，取决于pH值，一般只有在蛋白质等电