最新乳腺癌转移相关基因ppt课件.ppt

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1、乳腺癌转移相关基因研究项目主要内容乳腺癌是女性最常见的肿瘤，每年全世界约130万人被诊断乳腺癌，而约40万病人死于该病．虽然乳腺癌患者术后５年生存率已有明显提高，但是有远处转移的患者预后很差，乳腺癌治疗失败主要是远处转移，它是肿瘤致死的主要原因．肿瘤的转移是一种多基因参与、多阶段演进的极其复杂的生物学过程。迄今为止,肿瘤转移的机制尚不十分清楚。目前国内研究往往是研究乳腺癌转移的其中一个相关基因的功能及与转移的关系，而肿瘤转移往往是多基因共同调控作用的结果，此方法无法清楚的解释肿瘤转移确切机制。随着肿瘤转移相关基因(转移基因与转移抑制基因)的不断发现与功能鉴定以及相关重要信

2、号传导通路的阐明,有力地推动了对肿瘤转移机制的阐明及其调控网络的破解。课题设计方案具体实验流程如下：（一）.SSH1．提取totalRNA分别抽提50对乳腺癌标本的总RNA，用于差减杂交。原发性乳腺癌组RNA:等量取50例原发性乳腺癌RNA（每例约4μg），均匀混合,总量约200μg肝转移性乳腺癌组RNA:等量取50例转移性乳腺癌RNA（每例约4μg），均匀混合,总量约200μg2.分离mRNA,正向消减中，乳腺癌组织作为tester肝转移组织作为driver，而在反向消减中，乳腺癌组织作为driver而肝组织作为tester。按照试剂盒操作得到2个差减杂交文库，一为原发

3、性乳腺癌高表达库，一为肝转移性乳腺癌高表达库3.将差减文库克隆入载体质粒。二、芯片制备从克隆中随机选择500个克隆（假设，多少由自己定），一部分为原发性乳腺癌中高表达的基因，另外一部分为肝转移性乳腺癌中高表达的基因。通过PCR得到扩增产物，经纯化后用芯片点样仪点在基片上，制备成cDNA芯片50张.三、芯片杂交50对乳腺癌样本RNA分别制备成cDNA荧光探针（如：原发性乳腺癌标记cy5,肝转移性乳腺癌标记cy3）,通过杂交扫描得到数据cy3/cy5的ratio值，即同一基因的表达量在转移性乳腺癌和原发性乳腺癌的比值）。分析芯片数据，选择出在50对标本中变化趋势相同的基因，即

4、乳腺癌转移相关基因。相关基因有两种，一是在绝大多数转移性乳腺癌高表达的基因，一是在绝大多数转移性乳腺癌低表达的基因（即原发性乳腺癌高表达的基因）。课题的研究意义1、根据芯片数据找到相应的克隆测序，与NCBI数据库比对，明确该基因信息，建立Her2/neu的过度表达乳腺肿瘤肝转移的cDNA文库。2、新侯选相关基因，向genebank提交，并注册。并且我们可以继续申请基金，进一步研究蛋白水平其功能，制备基因的相应抗体，进行靶向治疗，申请专利．３已知相关基因，可以在蛋白水平进行相关基因的研究。购买或制备感兴趣基因的相应抗体，研究在蛋白水平的变化趋势是否与RNA水平一致，研究乳腺

5、癌肝转移过程的信号异常传导通路，进一步研究乳腺肿瘤肝转移发生机理。3、统计分析：结合病人资料，用多因素回归的统计方法研究Her2/neu的过度表达乳腺肿瘤肝转移相关基因与肝转移发生危险和预防的关系．建立数学模式：Ｙ＝Ｘ１Ｇ１＋Ｘ２Ｇ２＋Ｘ３Ｇ３＿＋ＸNGN，对乳腺癌肝转移进行预测．如检测到Ｙ＞Ｐ，可以对患者进行肝动脉介入，预防及降低肝转移的风险．４、制作乳腺癌肝转移相关基因的预警芯片，对乳腺癌是否会肝转移进行预测。用患者外周血，进行肝转移随访．５、指导乳腺癌的化疗：对通过基因芯片预测的肝转移可能性低的病人避免过度化疗，减少盲目化疗的副作用，降低病人的治疗费用，减低患者的负

6、担。6、在后续研究中，我们可进一步申请基金研究乳腺癌肺转移，乳腺癌骨转移相关基因群。进一步完善乳腺癌的转移机制．7、通过转移相关基因组与蛋白组相对接,研究乳腺癌转移相关的分子网络及调控机制.８、是否在Ｈer2高表达的乳腺癌有抑制ＥＲ基因表达的机制．（二）核受体的结构配体结合区(ligandbindingdomain,LBD)DNA结合区(DNAbindingdomain,DBD)两锌指结构转录激活区(transcriptionalactivationdomain,TAD)NH3+转录调节DNA结合配体结合HSP结合COO-HBDTADDBDLBDA/BCDEFAF1AF2

7、膜信号对核受体和共激活因子的影响多种膜受体信号转导通路中激活的蛋白激酶可以导致核受体和共激活因子的磷酸化，使：核受体非配体依赖性的激活；2.共激活因子在不同细胞区室间的移位，增强它们的转录激活刺激功能，改变它们与多种DNA结合蛋白/核受体转录相互作用的优先性。甾体激素受体抑制基因表达的可能机制：1.通过negativeresponseelement。2.通过在转录水平与其他转录因子的相互拮抗作用GR在转录水平拮抗NF-B和AP-1转录激活作用，如与NF-κB和AP-1竞争共激活因子CBP/p300膜信号对核受体和共激活因子的