天然产物活性成分检测.doc

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1、个人收集整理勿做商业用途陈羽迪201233287000212生物制药（1）茶叶中茶多酚的粗提取与含量测定实验报告一、实验目的：1、了解并熟悉茶多酚的元素组成、结构构成、理化性质。2、掌握溶剂萃取法粗提取茶多酚的原理与操作.3、掌握酒石酸铁比色法测定茶多酚的含量的原理及操作。4、了解分光光度计的使用方法和注意事项。二、实验原理和应用：茶多酚(TeaPolyphenols）是茶叶中多酚类物质的总称,包括黄烷醇类、花色苷类、黄酮类、黄酮醇类和酚酸类等。其中以黄烷醇类物质（儿茶素）最为重要。茶多酚又称茶鞣或茶单宁，是形成茶叶色香味的主要成份之一，也是茶叶中有保健功能的主要成份之

2、一。研究表明,茶多酚等活性物质具解毒和抗辐射作用，能有效地阻止放射性物质侵入骨髓，并可使锶90和钴60迅速排出体外，被健康及医学界誉为“辐射克星”.目前国内外茶多酚粗品的提取的方法主要有:溶剂萃取法、离子沉淀法、树脂吸附分离法、超临界流体萃取法、超声波浸提方法、微波浸提法等等。在这些提取茶多酚的方法中,每种方法都有它各自的针对性和使用范围,使用时要根据各自的情况而定。根据实验室的条件及实验要求,本实验采用溶剂萃取法对干茶叶中的茶多酚进行粗提取，即利用茶多酚易溶于乙酸乙酯等有机溶剂的原理进行液-液萃取。茶多酚的测定方法有高锰酸钾直接滴定法和酒石酸铁比色法,由于高锰酸钾直接

3、滴定法操作比较复杂，且靠肉眼观察颜色判断终点，如果样品溶液颜色较深时，可能影响测定结果。本实验将应用酒石酸铁比色法测定茶多酚的含量。酒石酸铁能与茶多酚生成紫褐色络合物，络合物溶液颜色的深浅与茶多酚的含量成正比.因此可以用比色方法测定.该法可避免高锰酸钾滴定法所产生的人为视觉误差。三、实验仪器、材料和试剂实验仪器：个人收集整理勿做商业用途分光光度计、干燥箱、电子天平、pH计、真空泵、纱布、漏斗、旋转蒸发仪、250ml容量瓶、50ml容量瓶、分液漏斗实验材料：干茶叶（市售散装茶即可）实验试剂：硫酸亚铁（FeSO4·7H2O)，酒石酸钾钠(KNaC4H4O6·4H2O)，磷酸

4、氢二钠（Na2HPO4·12H2O），磷酸二氢钠(NaH2PO4·2H2O），乙酸乙酯.四、实验步骤与方法1、溶液的配制酒石酸亚铁溶液制备:称取0。25g（准确至0。0001）硫酸亚铁，1.25g酒石酸钾钠（准确至0.0001），用水溶解并定容至250ml（低温保存，有效期10天)。2、干茶叶的预处理将干茶叶洗净、晾干，烘干,最后粉碎.粉碎的目的是与液体的接触面增大使提取率增高。由于试验条件的限制，用剪刀代替粉碎机将干茶叶剪碎，并且用研钵研细,干茶叶量为50.00g。3、茶多酚的粗提取与定性检测称取经过预处理的干茶叶末30.00g,加入250mL90℃接近沸水中搅拌浸提

5、、过滤,先后用250mL的乙酸乙酯萃取两次。合并两次有机相。减压蒸馏除去乙酸乙酯溶剂得黄色粉末状茶多酚。从外观上看,为黄色粉末状。物理性能为，易溶于水及乙醇,味苦涩。4、茶多酚溶液的配置与含量的测定称取步骤3中提取的茶多酚粉末0。2500g，加水溶解定容至250mL，混匀,即为每毫升含1mg步骤3中提取的茶多酚粉末的溶液。分别取茶多酚溶液1。0mL、2。0mL、3。0mL、4.0mL于4个50mL容量瓶中,各加水至10mL，再加酒石酸亚铁溶液10mL,加入pH为7。5的磷酸缓冲液至刻度，混匀后用1cm比色皿,以空白试剂作参比,于波长540nm处测定吸光度A，计算实验数据

6、，并绘制实验数据表格。五、实验现象和数据处理将高山茶叶磨成粉末,加入蒸馏水得混有粉末的深绿色液体，水煮后颜色变黄，变为草绿色。乙酸乙酯萃取后，上层浅黄色透明溶液,下层墨绿色浑浊液体,两相间的乳化层有大量较大气泡。轻微摇晃后气泡消失分层明显。经过旋蒸后得0。79g黄色粉末茶多酚。茶多酚溶液加入酒石酸亚铁溶液后颜色变为蓝紫色,颜色随茶多酚浓度增加而变深。个人收集整理勿做商业用途ω—茶多酚的含量(%），A—样品溶液的吸光度值,T—样品溶液的总体积（mL)V-测定用样品溶液的量(mL），m—样品质量(g）3。913-用1cm比色杯，当吸光度为1。0时，试液中茶多酚的浓度为3.9

7、13（mg/mL）表Error!Bookmarknotdefined.实验数据汇总实验次数AT（mL)V（mL）m（g）ω(%)ω（mg/g)10.1045030.0016。78367。820.2235030.0027.27272。730.3625030.0037.87078.740.4635030.0047.54975。55、实验结果检验--绘制茶多酚标准曲线根据步骤4中所得的实验数据,绘制茶多酚标准曲线,斜率R处于0。95—1.05之间方可达到实验要求。表Error!Bookmarknotdefined.绘制标准曲线所需数据V（mL)