最新HLAB27检测及其临床应用详解PPT课件.ppt

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1、HLAB27检测及其临床应用详解HLA-B27及其临床应用HLA-B27疾病相关血清阴性脊柱关节病类型及特点强直性脊柱炎特点及其与B27关联机制HLA-B27检测方法MLCT、ELISA、IMS-ELISA、FCM、PCR-SSP2HLA-B27相关疾病3HLA-B27相关疾病：强直性脊柱炎AnkylosingSpondylitis，AS患病率：0.3%，20-30岁，男女比例10:1，有家族倾向；主要侵犯：中轴关节（骶髂关节、脊柱骨突、脊柱旁软组织）可伴发外周关节及关节外表现，严重者发生脊柱畸形和关节强直B27检测可作为有相关症状或高危人群AS早期的筛选方法！AS不是RA

2、的一种特殊类型！7HLA-B27阴性的AS约5-10%的AS患者为HLA-B27阴性AS患者的HLA-B27阳性率达90-95%我国汉族人群HLA-B27阳性率2-7%（3千万-1亿），AS患病率为0.3%（＞4百万），大部分HLA-B27阳性者并不发生AS。HLA-B27与AS8HLA-B27与AS健康人群HLA-B27阳性率及AS患病率各地区、种族有显著的差异HLA—B27与强直性脊柱炎的发病有很强的相关性两种错误认识：HLA-B27阳性≠AS！HLA-B27阳性不会转阴！9HLA-B27检测方法及评价抗原水平微量细胞毒法ELISAIMS-ELISA流式细胞术法基因水平

3、PCR-SSP10微量细胞毒法（microlymphocytotoxictest，MLCT）原理：如果受试者淋巴细胞表面表达有相应的HLA-B27抗原，就可以与B27抗体结合，形成Ag-Ab复合物激活补体，发生对细胞膜的破坏及细胞杀伤作用，通过染色法观察，死细胞的细胞膜通透性改变，染料能够进入使之着色，而活细胞细胞膜完整不被染色。根据死细胞占全部细胞的百分比，可以判断受试者淋巴细胞表面是否存在HLA-B27抗原及其与抗体的反应强度。优点：不需特殊仪器设备，易于操作，一般的实验室都可开展。缺点：标本存放不能超过8小时；感染可以使细胞膜表面的B27分子的数量或结构改变，影响ML

4、CT的结果，易出现假阴性。11ELISA原理：应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中HLA-B27水平。用纯化的B27抗体包被微孔板，依次加入HLA-B27抗原（待检标本）、生物素化的抗HLA-B27抗体、HRP标记的亲和素，形成双抗体夹心反应，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的HLA-B27呈正相关。其结果与MLCT法符合率为99％，且不受感染因素的影响，重复性好。12磁珠酶联免疫分析（IMS-ELISA）磁珠分离与ELISA结合B27单抗标记磁珠HRP标记CD45单抗通过磁场分离游离

5、相优点：反应时间短（1小时完成）对标本新鲜度要求不高2～8℃静置4d之内可用杨雅琼等．现代检验医学杂志，2002,17(2):60-6213流式细胞术法利用荧光标记的HLA-B27单克隆抗体，与细胞表面的B27抗原结合，使结合后的淋巴细胞具有一定的荧光强度，这种荧光强度可由流式细胞仪测得的通道值来反映，以其值的高低判断HLA-B27抗原表达百分比，从而判断HLA-B27是否阳性。优点：全自动仪器检测，减少了人为因素的影响，重复性高，结果判断准确，为目前较为理想的方法，国外已将FCM法检测HLA-B27作为AS诊断的常规检测方法。缺点：仪器昂贵，目前只在较大医院应用，且荧光易

6、淬灭。14PCR-SSP通过设计基因序列特异的引物SSP，特异性的扩增出标本中的HLA-B27基因片段，以琼脂糖凝胶电泳分析PCR扩增产物，若出现目的条带则表示HLA-B27为阳性。优点：基因水平的检测直接对HLA-B27原基因进行扩增分型，灵敏度高，特异性强。缺点：耗时长，需要跑电泳，需要特定的实验仪器及严格的实验条件，在临床上普遍开展此项检查有一定的难处。15谢谢大家！16软件工程SoftwareEngineering武汉大学计算机学院第7章面向对象程序设计语言程序设计语与软件设计方法几种典型面向对象程序设计语言面向对象程序设计语言的选择面向对象程序设计风格一、程序设计

7、语与软件设计方法语言研究先于方法研究过程性语言与结构化程序设计方法过程性语言：50—60年代末，FORTRAN、ALGOL、COBOL、APL/I等写程序方便、程序规模越来越大，正确性与可靠性成为主要矛盾结构化程序设计方法，并发展为SA/SD的软件开发方法，方法又促进结构化程序设计语言的发展，如Pascal、Ada等一、程序设计语与软件设计方法面向对象语言与面向对象方法60年代末：Simula(67)、Smalltalk、Eiffel等80年代初：抽象数据类型ADT(AbstractDataType)+OOPL导制