最新4液相日常维护与保养教学讲义PPT.ppt

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1、4液相日常维护与保养HPLC的日常操作条件最好是恒温、恒湿温度：15—30℃相对湿度<80%房间应有良好的通风空调或其他设备产生的气流不要直吹仪器避免光线直射远离高电干扰、高振动设备泵的使用与维护注意事项防止任何固体微粒进入泵体（0.2um或0.45um的微孔滤膜过滤）流动相不应含有任何腐蚀性特质，含有缓冲液的流动相不应保留在泵内泵工作时防止溶剂瓶内的流动相用完，否则空泵运转也会磨损柱塞、密封圈，最终产生漏液输液泵的工作压力决不要超过规定的最高压力流动相应先脱气，以免在泵内产生气泡，影响流量的稳定性缓冲的使用使用前必须过滤使用后

2、一定要进行清洗，以免造成腐蚀、磨损、阻塞:第二天接着用：用20%甲醇：80%水冲洗20-30分钟隔几天再用：用甲醇：水冲洗后，再用纯甲醇冲洗易受到细菌和霉菌的影响不能直接用有机溶剂冲洗流动相的过滤过滤：0.45um或更小孔径滤膜目的：除去溶剂中的微小颗粒，避免堵塞色谱柱，尤其在使用无机盐配制的缓冲液时过滤膜种类水系过滤膜水系滤膜严禁用于有机溶剂，否则滤膜会被溶解有机系过滤膜脱气目的：除去流动相中因溶解或混合而产生的气泡产生原因：温度上升压力下降溶剂混合流动相的脱气流动相的贮存流动相一般贮存于玻璃、聚四氟乙烯容器中，不能贮存在塑料

3、容器中。容器一定要盖严，防止溶剂挥发引起组成变化，也防止氧和二氧化碳溶入流动相。磷酸盐、乙酸盐缓冲液很易长霉，应临用现制。容器应定期清洗，以除去底部的杂质沉淀和可能生长的微生物。流动相过滤头产生的问题故障特征“鬼峰”(由已被污染的过滤头造成)保留时间不断改变(由于过滤头堵塞或部分堵塞)清洗步骤：1.水2.稀硝酸3.水4.异丙醇5.水(超声波清洗,玻璃慎用)流路中形成气泡引起的问题改变保留时间和峰面积流动相中形成气泡对液流的不良影响泵中形成气泡使液流波动峰变形柱中气泡形成和累积使流动相绕流尖峰或锯齿状噪声检测池中气泡形成和累积产生

4、基线噪声1.使用流动相溶解样品--减少溶剂峰，尤其是组分峰靠近溶剂峰时由为重要--保证样品在流动相中的溶解度，避免样品在系统中尤其在柱中产生沉淀2.进样前最好使用0.45um的膜进行过滤如果样品很脏，要使用0.2um的膜进行过滤样品处理梯度洗脱优点：可提高分离度、缩短分离时间和提高分离精度注意事项：溶剂的纯度要高，否则梯度洗脱的重现性差，进行样品之前必须进行空白梯度洗脱，以辨认溶剂杂质峰。梯度混合的溶剂互溶性要好梯度洗脱应使用对流动相组成变化不敏感的选择性检测器（如紫外吸收检测器或荧光检测器），而不能使用对流动相组成变化敏感的通

5、用型检测器（如示差折光检测器）每次梯度洗脱之后要对色谱柱进行充分的平衡。梯度洗脱溶剂混合产生的问题流动相中所使用的不同溶剂必须互溶流动相中溶剂不互溶会导致:1.基线漂移，2.保留时间的重现性差，3.出现肩峰和“鬼峰”的问题.无流动相流出，又无压力指示泵内有大量气体打开泄压阀，以较大流量（5mL/min)运转，密封圈损坏更换压力和流量不稳有气泡打开泄压阀，以较大流量（5mL/min)运转，单向阀内有异物稀硝酸超声清洗压力高堵压力低漏故障可能原因解决办法输液泵发生故障及相应排除措施操作注意点：1）样品溶液必须用0.45um的滤膜过滤

6、2）样品溶液pH小于10进样器的保养进样体积过大的进样体积会导致产生宽峰或峰形不对称通常引起色谱柱过载或超出检测器的检测限是由于样品浓度过高而不是体积的问题注意：使用微径柱时，必须保证柱子不要过载柱子在任何情况下不能碰撞、弯曲或强烈震动色谱柱的维护与保养柱的保养当柱子和色谱仪联结时，阀件或管路一定要清洗干净要注意流动相的脱气避免使用高粘度的溶剂作为流动相进样样品要提纯控制进样量每天分析工作结束后，要清洗进样阀中残留的样品每天工作结束后用适当的溶剂来清洗柱当分析柱长期不使用，应用适当有机溶剂保存噪音高或基线漂移常见问题可能原因柱子

7、没有平衡好杂质组分从色谱柱中缓慢流出杂质在柱子中的富集检测器或色谱柱的温度差异系统有气泡检测器氘灯需更换电压不稳造成干扰解决办法继续冲洗色谱柱至平衡利用强极性的溶剂冲洗色谱柱冲洗色谱柱；提高样品的预处理；使用色谱纯的溶剂使用色谱柱恒温箱流动相脱气；更换氘灯使用稳压电源；检查供电系统出现“鬼峰”常见问题可能原因上一针样品中没有完全流出的物质色谱柱被污染溶剂中有杂质流动相和溶解样品的溶剂不互溶解决办法待样品中的组分尽可能完全流出后才进下一个样品；每运行完一个样品后用强极性的溶剂冲洗色谱柱；改进样品的预处理每运行完一个样品后用强极性的

8、溶剂冲色谱柱；改进样品的预处理使用色谱纯的溶剂尽量用流动相溶解样品；出现肩峰或前延峰常见问题可能原因柱头“塌陷”造成死体积溶解样品的溶剂选择错误干扰物质的存在；样品中的杂质色谱柱过载柱外效应的影响解决办法更换色谱柱用流动相溶解样品改进样品预处理；使用色谱纯溶剂将