高效液相色谱的维护与保养.ppt

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1、高效液相色谱的维护与保养液相色谱仪器的使用及保养色谱泵的保养流动相要过滤常用缓冲液时，停泵前要用水冲洗，并用水冲洗柱塞杆清洗孔拧紧排液阀时，不要太用力，以不渗液为准更换流动相时，要保证两种溶剂的互溶性,如不互溶，要用一种中间溶剂过渡.例如:使用无机盐缓冲液时,用前和用后均须用水过渡流动相的脱气流动相脱气的目的使色谱泵的输液准确输液均匀准确，并且脉动减小保留时间及色谱峰面积的重现性提高提高检测的性能防止气泡引起的尖峰基线稳定，信噪比增加溶剂的紫外吸收本底降低保护色谱柱减少死体积防止填料的氧化流动相脱气的方法加热简单，如同抽真空一起使用，其效果很好。但容

2、易造成流动相组成的变化抽真空同上，一般在溶剂抽滤的同时，也有脱气的效果超声波简单，但效果不理想。通惰性气体（一般用氦气）可保持连续脱气，多用于低压梯度在线脱气机可保持连续脱气，多用于低压梯度色谱泵的排气操作使用前，应先确认泵头内没有气体，如有气体要按以下步骤排气：将排液阀反时针转2-3圈，用10ml注射器抽，直到出液按以下方法之一将泵的后面放空将U6K的C阀打开，或717设在PURGE状态或，将参比阀打开或，把色谱柱摘下打开电源开关开大流速到6~9ml/min同时用10ml注射器从排液阀注入流动相直到泵后的流速稳定无气泡为止色谱泵的运行注意用外部控制

3、器与用泵面板控制的区别有些型号的外部控制器与面板不能同时用如需要面板控制，需要断开控制线或关闭控制器排气后的色谱泵即可运行注意∶排气后，先设流速为0恢复排气时断开的部分，如∶进样器、色谱柱如需要，恢复排气时断开的控制线根据色谱柱的不同，逐渐提高流速到设定值液相色谱对流动相的要求除色谱柱对流动相的要求外，还有∶与检测器匹配脱气避免卤素离子（不锈钢系统）溶剂的粘度防止细菌的生长流动相的保存有机溶剂流动相:室温下密封,避光保存缓冲盐流动相:当日现配现用低温下密封保存,一般不超过3天防止长菌有机溶剂与水（缓冲盐）混配的流动相:低温密封保存防止有机相的挥发选用

4、适宜的容器2星期1天1星期1小时新鲜配制5101520250分保存于聚乙烯瓶中的超纯水测试条件水样:40mltraceenrichment@2.0ml/min色谱柱:C18反相柱(Waters)梯度:线性100%水－100%乙腈波长:254nm1天1星期新鲜配制5101520250分保存于标准棕色玻璃瓶中的超纯水测试条件水样:40mltraceenrichment@2.0ml/min色谱柱:C18反相柱(Waters)梯度:线性100%水－100%乙腈波长:254nm检测器的保养如长时间不用检测器可以关掉紫外灯在4小时以上不用时，太频繁开关也不好不要

5、让缓冲液长期停滞在检测池内用纯水冲洗示差检测器及荧光检测器注意流动池的耐压，不要在后面加压关于自动进样器的针清洗PurgeInjector与NeedleWash洗针溶剂瓶(绿色塑料管)不要放在717plus的上部，应放于717plus同一水平面洗针溶剂根据流动相的不同应有不同：异丙醇？液相色谱系统的清洗与钝化一般采用30％磷酸作为清洗剂，用6M硝酸作为钝化剂，先清洗再钝化清洗的目的是去除不锈钢管路及系统内的污垢钝化的目的是使不锈钢管路的内表面形成光滑均匀的氧化膜高效液相色谱的维护与保养色谱柱的使用及保养测柱效–良好的色谱实验习惯拿到一根新色谱柱时，先

6、测柱效保留在新色谱柱上测得的色谱图，并记录色谱测试条件定期检测柱效定期检测仪器的谱带展宽测柱效的方法色谱柱种类繁多,性能各异,测定方法亦各不相同Waters的色谱柱均附有UseandCare说明书,可按说明书所述方法测定以下是Waters反相C18柱的测定方法:流动相:乙腈/水=60:40;流速:1ml/min样品:50mgAcenaphthene(二氢苊)溶于100ml乙腈,加入600μl丙酮进样量5μl检测波长:254nm计算色谱柱的柱效N理论塔板数计算公式：Ws方法Wtan16切线法Wh5.54半峰高W3s93sW4s164sW5s255s色谱

7、柱的正确使用及操作流动相的转换特别是GPC柱流速(压力)的变化幅度：0.1ml/min凝胶柱（GPC及糖柱）温度的变化幅度专用色谱柱∶样品及溶剂的要求色谱柱与仪器的联接不同公司的色谱柱接头不同。处理不当时会造成严重后果：色谱峰展宽（死体积）致使柱效下降或渗漏解决办法：自制相应的转换接头使用“通用”型接头（锥箍及螺母）这种锥箍在不锈钢管上是活动的，即stop-depth长度可调。因此可以换接不同的色谱系统及色谱柱。从WatersPhaseSeparations公司能得到一些PEEK工程塑料的接头,可用在各种类型的色谱柱上。色谱柱的联接各种锥箍和管路接头

8、长度示意图:谱带展宽连接适当连接不妥由于色谱柱连接不当引起的谱带展宽，机械问题色谱柱安装及连接的机械因素连接