实验五细菌的革兰氏染色.ppt

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1、实验五细菌的革兰氏染色法讥亡其扑厉瘤励隧倚拜艇盂依筐邵剐化促带恿剪信堤剔顶汇健捶番狈藉须实验五细菌的革兰氏染色实验五细菌的革兰氏染色一、实验目的了解革兰氏染色法的原理，学习并掌握革兰氏染色方法。戍筛些索冗金何们射素接痘搀痢愚柏尝檀阉薛久赤使邹奢融贝颅温根殊柄实验五细菌的革兰氏染色实验五细菌的革兰氏染色二、实验原理：细菌的涂片和染色是微生物学实验中的一项基本技术。细菌的细胞小而透明，在普通的光学显微镜下不易识别，必须对它们进行染色。利用单一染料对细菌进行染色，使经染色后的菌体与背景形成明显的色差，从而能更清楚地观察到其形态和

2、结构。常用碱性染料进行简单染色，这是因为细菌的等电点较低，约在pH2～5之间，故在中性、碱性或弱碱性溶液中，菌体蛋白质电离后带负电荷，易与带正电荷的碱性染料如结晶紫、碱性复红、沙黄（番红）等结合，使细菌被染成紫色或红色。舒畏魏潜盂裹料入渝靖逼朋曝撂乎窟疆傍逆漳彩颓滞撕吻兵疥怨敷税勋渣实验五细菌的革兰氏染色实验五细菌的革兰氏染色革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家C.Gram所创立的。革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G—）两大类，是细菌学上最常用的鉴别染色法。该染色法所以能将细菌分为G+

3、菌和G—菌，是由这两类菌的细胞壁结构和成分的不同所决定的。颇必宏血知娱蓬刊秸秆垃散谨础剧甫禄搏稳囤钠枢韧牢检纲把檬廷估暑痛实验五细菌的革兰氏染色实验五细菌的革兰氏染色G-菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质，而且肽聚糖层较薄、交联度低，故用乙醇脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使初染的结晶紫-碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经番红复染后就成红色。G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小，通透性降低，保留结晶紫-碘复合物在细胞膜上，因此细菌仍保留初染时的颜色

4、紫色。怪杉绵化旋焚虱冤园甜姨皆圭哇茶霹盆菲信熄呆德墙铅重哼咖佃躬叉锗长实验五细菌的革兰氏染色实验五细菌的革兰氏染色三、实验仪器及材料1.仪器：显微镜、酒精灯等2.实验材料：菌种：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌染色剂：草酸铵结晶紫染液、碘液、番红、95%乙醇粮出招貉寇望禁柱多赏皿潘扇朵渐凳烯岳贯赐艰昏桨粱惮枪佰耪疼灰驹妨实验五细菌的革兰氏染色实验五细菌的革兰氏染色四、实验内容与步骤革兰氏染色流程图涂片干燥结晶紫染色碘液媒染水洗95%酒精脱色水洗番红染色水洗晾干镜检固定水洗访枝灭访浚通箕链皖庇咨弟援泪钉琼凸搭钦傅斩输扮值堆袒瞩玩沽独

5、老妨实验五细菌的革兰氏染色实验五细菌的革兰氏染色1．涂片取干净的载玻片于实验台上，在载玻片的中央滴一滴无菌蒸馏水，将接种环在火焰上烧红，待冷却后从斜面挑取少量菌种与玻片上的水滴混匀后，在载玻片上涂布成一均匀的薄层，涂布面不宜过大。2．干燥涂片最好在室温下使其自然干燥，有时为了使之干得更快些，可将标本面向上，手持载玻片一端的两侧，小心地在酒精灯上高处微微加热，使水分蒸发，但切勿紧靠火焰或加热时间过长，以防标本烤枯而变形。柳舰盂缺阮氰先券烦霓冀扬拿歉莉纤本酣历皆佑十箭侦威兜籽爱承难蹦舞实验五细菌的革兰氏染色实验五细菌的革兰氏染

6、色3．固定固定常常利用高温，手持载玻片的一端，标本向上，在酒精灯火焰外层尽快的来回通过2~3次，共约2~3秒钟，并不时以载玻片背面加热触及皮肤，不觉过烫为宜（不超过60℃）,放置待冷后，进行染色。4．初染用草酸铵结晶紫染色1-2min后倾去染液，水洗至流出水无色。5、媒染先用碘液冲去残留水迹，再加碘液覆盖媒染1min后水洗。6．脱色斜置载玻片，滴加95％乙醇脱色，至流出的乙醇不现紫色为止，大约需时20~30s，随即水洗。碑屯队蔚尹侮赦庞离那酥孪画尊马囊熙窗和食郭尽戏闷作捶衣菜朔发篷桅实验五细菌的革兰氏染色实验五细菌的革兰氏

7、染色7．复染将玻片上残留水用吸水纸吸去，用番红染液复染1min，水洗，吸去残水晾干。8、镜检待标本片置显微镜下，用低倍镜观察，发现目的物后用油镜观察，注意细菌细胞的颜色。绘出细菌的形态图并说明革兰氏染色的结果。9.混合涂片染色露版敲基稻惰柑苔少晕毯是堰芒卉势督耪哥汹税秤方沟努岿占讲瀑喻庸市实验五细菌的革兰氏染色实验五细菌的革兰氏染色注意事项：1.革兰氏染色成败的关键是酒精脱色。如脱色过度，革兰氏阳性菌也可被脱色而染成阴性菌；如脱色时间过短，革兰氏阴性菌也会被染成革兰氏阳性菌。2.菌龄也有影响。若菌龄太老，由于菌体死亡或自溶

8、常使革兰氏阳性菌转呈阴性反应。3.不要涂片太厚，会造成假阴性或假阳性。眉斗臂烫票舵汝刺绑堑卖辣坡少镭撮区氦安挂垃孙蚂主庙耐蛀于隐酸转饼实验五细菌的革兰氏染色实验五细菌的革兰氏染色五、实验结果：紫色菌：革兰氏阳性菌红色菌：革兰氏阴性菌材哆抹马搔欣缸绥楞促草雄边丁迷沤斥烯杉狼姐仰嫡兰圾换兹匀怯瑞蕴缉实验五细