实验四 细菌的简单染色和革兰氏染色.ppt

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1、一、目的与要求1、掌握细菌涂片标本的制备2、掌握革兰氏染色法的步骤和关键点3、识别细菌革兰氏染色结果实验四细菌的简单染色和革兰氏染色二、实验原理：细菌的涂片和染色是微生物学实验中的一项基本技术。为什么要对细菌染色？细菌的细胞小而透明，在普通光学显微镜下不易识别，必须对它们进行染色，使经染色后的菌体与背景形成明显的色差，从而能更清楚地观察到其形态和结构。用于生物染色的染料主要有碱性染料、酸性染料和中性染料三大类。简单染色法可用以观察微生物的形状、大小及细胞排列状态，是微生物技术中应用广泛，操作简便的染色法。革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌(G)和革兰氏

2、阴性菌(G-)两大类，是细菌学上最常用的鉴别性染色法。其原理是利用细菌的细胞壁组成成分和结构的不同。革兰氏阳性菌的细胞壁肽聚糖层厚，交联而成的肽聚糖网状结构致密，经乙醇处理发生脱水作用，使孔径缩小，通透性降低，结晶紫与碘形成的大分子复合物保留在细胞壁内使细胞呈蓝紫色，而革兰氏阴性菌肽聚糖层薄，网状结构交联少，且类脂含量较高，经乙醇处理后，类脂被溶解，细胞壁孔径变大，通透性增加，结晶紫与碘的复合物被溶出细胞壁，再经番红复染后细胞呈红色。三、实验器材1、菌种牛肉膏琼脂斜面28℃培养24h的大肠杆菌(Escherichiacoli)斜面菌种，牛肉膏琼脂斜面28℃培养16

3、h的枯草杆菌(Bacillussubtilis)斜面菌种；2、仪器显微镜；3、材料载玻片，香柏油，二甲苯，擦镜纸，吸水纸，染色缸等。4、染料草酸铵结晶紫染色液，路哥氏(Lugol)碘液，95%乙醇，0.5%番红染色液；细菌的简单染色步骤：涂片干燥固定染色水洗干燥镜检细菌的革兰氏染色步骤：涂片干燥固定结晶紫染色水洗干燥镜检碘液媒染水洗乙醇脱色番红复染水洗水洗五、实验关键步骤和注意点：1、玻片要洁净无油，否则菌液涂不开。2、挑菌量宜少，涂片宜薄，过厚则不易观察。涂片厚度适当。3、固定温度适当。4、革兰氏染色成败的关键是脱色时间，脱色程度适当。5、染色过程中勿使染色液干

4、涸。六、实验报告1.画出你所观察到的形态并标出革兰氏染色结果。2.思考题(p241,4)：（1）涂片后为什么要进行固定？固定时应注意什么？（2）革兰氏染色步骤是什么？其中关键步骤是什么？（3）为什么必须用培养24h的菌体进行革兰氏染色？