疟疾血片制作.ppt

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1、疟疾血片制作临沧市疾病预防控制中心史爱军2016年3月主要内容■血片的制作■血片的染色■影响血片制作质量的因素及注意事项◆重点应掌握的要点：▲疟疾血片厚、薄血膜的制作要领。▲疟疾血片制作注意事项。▲掌握血片制作技巧、反复练习。一、血片的制作（一）采血：1、使用的器材准备：◆一次性采血针◆75%酒精◆棉棒（球）◆载玻片◆推片◆记号笔或铅笔。血片的制作续…2、采血时间：症状发作后数小时至10小时之内。3、采血部位消毒：用沾有碘酒的棉棒在患者手指末端、耳垂、拇趾或足跟（婴幼儿）从内向外画同心圆。4、采血：将采血针迅速刺入取血部位1~2mm深，用大拇指、食指协同挤出血滴。第一滴

2、血因含有酒精，用棉签擦去。再挤出第二滴血用于制作血片。血片的制作续…（二）涂制血片1、取血:将载玻片平均划分为2等份，用推片的一角从患者刺血部位沾取血样放在载玻片上，或用载玻片直接沾取血样。于载玻片中央偏右3mm处粘取4~5ul（相当于一个火柴头大小）血液用于涂制厚血膜，在玻片中央偏左3-5mm处粘取1~1.5ul血液（相当于1/4火柴头大小）用于涂制薄血膜。要求:先沾取厚血膜血样，再沾取薄血膜血样。血片的制作续…2、制片：左手拇指和食指托住载玻片的两个短边，右手拇指和食指同时捏住推片和载玻片，使推片保持25度~35度角，用推片短边的下缘平抵血样前3-5mm处，然后推片

3、顺着载玻片缓慢地向后退，边退边观察血液在推片的扩展情况，当血液向两侧扩展至距载玻片边缘2mm时，停止后退，然后匀速向前推，直至推片抵到拿载玻片的手指。推片时，右手拇指和食指要贴紧载玻片，避免推歪。薄血膜要成舌状，厚度应以红细胞之间互相接触而不重叠为佳。▲将推玻片向1的方向稍抽回，当血液充满推玻片适当宽度（约2cm）后，以一定均匀的速度向2的方向滑动（约2.5cm）。薄血膜制作制作薄血膜：制作薄血膜：注意：血滴大，速度快、角度大血膜厚血滴小，速度慢、角度小血膜薄◆血涂片质量评价：血膜均匀、厚薄度合适、无空泡、无划痕薄血膜头体尾位置和形状好、无停顿起伏、两侧留出空间薄血膜血

4、球分布情况：厚血膜制作：推好薄血膜后，再用推片一角由内向外划圈涂制直径0.8~1cm的圆形厚血膜（厚度以一个油镜视野内可见到5~10个白细胞为宜）。血片的制作续…3、编号：血膜制成后，立即用特种蜡笔或水笔于玻片面上写上受检者的号码，以防差错，待薄血膜干后再用铅笔于薄血膜中写上血片种类的代号和受检者的个人编号，依次顺序插入标本盒内。每张载玻片上可做1个薄血膜和1个厚血膜，如图：各种不同的疟疾血片涂制法：标准血片门诊发热病人血片居民普查血片血片的制作续…4、干燥：可自然干燥，也可在手掌大鱼际肌上摩擦干燥。或者使用酒精灯或电吹风加热干燥，但需当心过度加热，烤伤血片。而且，加热

5、后必须待冷却至室温方能染色或固定，否则染色冲片血膜会脱落。5、固定：干燥后的血片用甲醇固定薄血膜。固定时，注意薄血膜一端朝下，避免固定厚血膜。二、血片染色▲血片染色在血片的制作过程中是一个重要的环节，染色质量的好坏，直接影响到疟原虫的检出率，也是直接影响疟疾病例确诊与否的关键。▲疟疾血片的染色有瑞氏染液和吉氏染液两种，我们现在重点介绍吉姆萨染液染色法。血片染色续…▲染液为省寄生虫病防治所统一配制的吉姆萨染液；为方便开展工作，经省寄生虫病防治所反复试验，缓冲液选择市面上供应的娃哈哈矿泉水为佳（在条件允许时配制pH7.0~7.2的缓冲液为最佳选择）。■注：珠海贝索生物技术有

6、限公司生产的Baso姬姆萨染液：——A液为染液——B液为稀释液血片染色续…▲染色方法：1.标准染色方法——1滴原液+1ml缓冲液，染20～30分钟2.快速染色方法——2滴原液+1ml缓冲液，染10～15分钟血片染色续…▲染色时，用吸管吸取配好的染液，以一定高度自由滴下染液。禁止用吸管搅拌玻片上的染液或者接触血膜。染色结束后将玻片浸入盆水中，使玻片保持水平并左右轻轻移动，至干净时从水中轻轻抽出。或者使用自来水冲洗，冲洗时，水平拿起载玻片（不要先倒掉染液），从载玻片无血膜区域（磨边处）用无冲击力的缓慢流水轻柔地把染液冲掉，在确保厚血膜不掉的前提下，从玻片另外一边再冲洗，直到

7、确认冲洗干净。晾干时注意薄血膜一端向下放置（用晾片板晾干）。血片染色续…▲未染色血片的保存※未染色的血膜放置时间，夏季不宜超过48小时，冬季不宜超过72小时。若送省级或国家检测，应待厚血膜干后，先用蒸馏水溶血，再用甲醇固定薄血膜，晾干包好后放入干燥的容器或自封袋中送检。三、影响血片制作质量的因素及注意事项※采血针一人一针；※载玻片脏：有油脂、污迹；※推片不规格；※取血不适度；※薄血膜过厚；※厚血膜制作不均匀；※染液杂质；影响血片制作质量的因素及注意事项续…※染液PH值不合适（适宜：7.0-7.2）；※过度染色或染色不够；※厚血膜溶解不够；