疟原虫血片制作染色

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1、2021/9/151疟原虫血片制作及染色技术湖北省疾病预防控制中心血片制作所需设备载玻片具有磨砂面，且规格是玻片宽度乘长度在25.2*75.2mm，厚度1mm~1.2mm为好。推玻片有专用的。但现在一般选择边缘光滑整齐的载玻片替代推玻片。采血针使用一次性的采血针。玻片盒木制/塑料均可以。75%酒精棉球用于采血部位的消毒。记号笔/B2铅笔用于载玻片上编写号码。Whatman(沃特曼)903号；将滤纸切成10*2cm大小的纸片，以口径为1.2cm的大孔管，在滤纸上压出两个圆形印迹备用。2021/9/153载玻片的清洗载玻片用以

2、涂制血膜的载玻片，必须清洁无油迹。有油迹的载玻片涂制的厚血膜容易脱落，薄血膜涂不均匀。新玻片处理应浸于有液态洗涤剂清水中10~20分钟，然后用干净棉巾逐个擦拭，再用清水冲洗干净，晾干后用干净柔软的棉巾擦亮备用。也可以95%的乙醇浸泡5~10分钟，再用纱布擦干擦亮备用。旧玻片处理用过的玻片浸泡洗涤剂溶液中1~2天或者浸泡于煮沸好的5%肥皂水中1~2小时，逐个擦去玻片上的旧血膜痕迹，用清水漂洗干净擦干擦亮。洗净载玻片处理每10~20张用白纸包好或者装原玻片盒里再放入塑料袋内，保存于干燥环境中备用。2021/9/154取血部位及

3、方法取血部位及方法取血部位以耳垂较为合适，也可在手指末端采血，婴儿可从拇趾或足跟取血。先用75%酒精棉球消毒取血部位后，以一次性采血针迅速刺入取血部位1~2毫米深，然后用左手大拇指、食指和右手中指协同挤出血滴。2021/9/155采血时间取血时机现症病人一般可随时取血，疟疾普查时可不考虑取血时机。但在诊断或需要某期疟原虫作标本时，则应掌握适宜的取血时机。间日疟在寒热发作时，外周血液中主要可见环状体期；发作后数小时，环状体发育到滋养体期，疟色素形成，形态较易辩认，为诊断疟疾的有利时机；36~48小时，可检出裂殖体；发作一、二

4、次后，配子体出现较多。恶性疟较理想的取血时间是在发作后至20小时内取血，初发患者退热后常查不到疟原虫。涂制血膜规则用于检查疟原虫的血涂片有两种：一种是将血液涂呈薄膜状，称薄血膜；一种是血液涂成圆盘状，称厚血膜。薄血膜上的血细胞要求平辅在玻片上面。涂片顺序，先厚后薄；位置分配，血片自左向右：薄-厚-标签；推薄片用玻片短边。制作厚血膜制作薄血膜2021/9/157厚血膜血量及涂片法厚血膜用推片的一角，从取血部位刮取约4~5微升血量（相当于火柴头大小），使血滴与平置的载玻片接触，再由里向外一个方向旋转，转2~4圈，涂成直径0.8

5、~1厘米大小圆形厚血膜，血膜厚薄均匀，过厚易于脱落，过薄达不到检出率的要求。2021/9/158薄血膜血量及涂片法薄血膜取洁净的载玻片2张，1张平置在桌上，以左手拇指，食指夹持载玻片两端（手指切勿接触玻片表面），用另一张边缘平滑（最好为磨口边缘）的载玻片做推片，用推片一端边缘的中点从取血部分刮取约1~1.5微升的血量（相当于1/4火柴头大小），使血滴与平置的载玻片接触，并形成25~35度夹角，待血液向两侧扩展约2厘米宽度时，均匀而迅速地轻轻向左推出（约2.5厘米长）且边缘带有“舌状”的薄血膜。2021/9/159涂制厚、薄

6、血膜的位置通常是将厚、薄血膜涂在一张载玻片上。方法是将载玻片分为3等分（留出标签或磨砂面位置后的3等分）。厚血膜涂在载玻片靠近标签或磨砂面方向的右1/3中央处，圆形、厚薄均匀、边缘整齐。薄血膜涂在载玻片1/2至左1/3的中部位置，舌状、厚薄均匀。2021/9/1510血片编号血膜制成后，立即将受检者的个人编号写在玻片磨砂面上（血片的编号要与血检登记本上编号一致）以防差错。2021/9/1511制作血膜的注意事项1.玻片清洗时，避免玻片碰撞、磨损。制作血膜的载玻片必须完全清洁而毫无油渍或污垢。制片时，手指只能持载片的边缘，不

7、能接触玻片表面，以免油污使薄血膜产生空白区以及厚血膜脱落。作为推片的玻片边缘一定要平滑，才能使推出的血膜均匀一致。2021/9/1512制作血膜的注意事项2.刚涂制的血膜要平放在标本盒内或者实验台面上。厚血膜未干前勿使标本片倾斜，以免未干的血膜倾向一侧，造成血膜厚薄不均，厚处不易溶血和着色而影响检查结果；晾干血膜时应注意防尘、防止苍蝇、蟑螂等昆虫吮吸血膜，干后应及时装入标本盒内。新木制标本盒需敞开放置一段时间，让木醇挥发后才能使用，以免厚血膜血红蛋白被其固定，不能溶血或染色效果不佳。2021/9/1513制作血膜的注意事项

8、3.血膜让其自然干燥，切忌用太阳晒或火烤，干透后才能用甲醇固定薄血膜。夏天标本尽可能24~48小时内固定染色；冬天也不能超过72小时。放置时间越久，厚血膜越不易溶血，染色效果也差。若不能及时染色，薄血膜宜先用甲醇固定（1~3分钟）然后用过滤清水或自来水对厚血膜溶血，晾干后包好置干燥器于冰箱内保存，用时将