微生物的分布测定技术

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1、第六章微生物的分布测定技术§-1必备知识一、微生物在自然界中的分布1、土壤中的微生物细菌、放线菌、真菌、藻类、原生动物、病毒。2、水中的微生物来自于土壤、空气、动物排泄物、动植物尸体、工厂和生活污水等。地下水地表水流动水静止水中流水近岸水病原菌:伤寒沙门菌、痢疾杆菌、霍乱弧菌等。粪便（病人、病畜）测定大肠埃希菌的数量作为水被粪便污染标志。我国的饮用水的卫生标准是：细菌总数每毫升不得超过100个，每1000ml水中不得超过3个大肠菌群数。3、空气中的微生物来源：飞扬的尘土、小水滴、人和动物体表的干燥脱落物、唾液飞沫、咳嗽、痰、喷嚏……种类：细菌、

2、霉菌的孢子、酵母菌、放线菌非致病性微生物结核杆菌、白喉杆菌、葡萄球菌、链球菌、肺炎双球菌、流感病毒、脊髓灰质炎病毒……致病性微生物微生物在空气中存活的时间比较短。但是许多病原微生物则可以存活一段时间。如：结核杆菌、白喉杆菌、葡萄球菌、链球菌、肺炎双球菌、炭疽杆菌、流感病毒、SARS病毒…….通过对空气中甲型链球菌的测定来作为空气被污染程度测定的指标。二、微生物在正常人体的分布正常菌群：正常条件下寄居在人体，对人体无害的微生物。条件致病菌：当机体的正常保卫机能减弱或微生物的寄居部位改变，正常菌群就会引起疾病。菌群失调：若长期服用抗生素抑制或杀死其

3、中的某些微生物，导致另一些耐药的微生物得以大量繁殖，正常菌群各微生物间的平衡被打破。（二重感染）三、制药设备、原料、操作人员、厂房建筑的要求1、对制药设备的要求结构简单、无角、无缝、易于清洗消毒。2、对原料的要求含微生物少……3、对操作人员的要求4、对包装的要求减少二次污染5、对厂房建筑的要求§-2空气中微生物分布测定技术一、原理悬浮在空气中的微生物落在适宜于它们生长的固体培养基表面，在适宜的温度下培养一段时间后，每个分散的菌体或孢子就会形成一个肉眼可见的细胞群体即菌落，通过观察菌落的特征和计数，可以大致鉴别空气中微生物的种类和数量。二、方法滤

4、过法：沉降法：利用微生物的尘粒因重力自然落到培养基的表面来进行测定。（10min、100cm2==20L）三、步骤1、制备平板2、检测3、培养4、观察记录5、计算100cm2培养基的菌落数=（每个平皿菌落数）*100/Лr2§-3从土壤中里纯化放线菌技术一、原理抑菌剂→分离二、方法1、制板2、制备土壤稀释液3、涂布分离4、培养5、挑菌6、纯化三、注意事项1、制板的温度2、吸管3、刻度吸管的操作4、稀释度不同，吸管要不同。5、涂布顺序：低→高。6、无菌操作7、标记位子8、放置§-4水中细菌总数和大肠菌群数的测定一、原理水涂布于营养琼脂表面，培养后

5、，菌落计数。大肠菌群是指在乳糖培养基中，经过24小时的培养，能发酵乳糖并产酸产气的一群兼性厌氧的革兰阴性的无芽孢的杆菌。二、大肠菌群的检测方法多管发酵法：滤膜法：微孔滤膜滤过，培养。鉴定菌落，计算。三、操作方法1、实验前准备2、水中细菌数的测定熔化培养基自来水采水样测定地面水1-7（P110）3、大肠菌群数测定滤膜过滤培养结果观察挑取菌落，镜检转移培养计算1L水样中的大肠菌群数=滤膜上的大肠菌群落数*10四、注意事项1、气泡2、地面水样的保存§-5皮肤口腔中的微生物分布测定技术一、原理皮肤直接接种培养基进行培养。口腔采集涂布培养。（葡萄球菌、链

6、球菌……）二、操作1、皮肤表面细菌的检查注意对照2、咽喉部微生物的检查（1）、涂抹法（2）、咳碟法§-6微生物数目直接测定技术一、原理血细胞计数板的使用。16*25或25*16=400（个）小方格长宽各1mm，深度0.1mm，体积0.1mm3。二、操作1、稀释2、染色3、加样（量、气泡）4、显微计数5、计算（P115）6、清洗三、注意事项1、菌液太稀或太浓，应从新稀释。2、计数时按一定顺序进行，对于压线的细胞可按计数上与右，不计下与左的原则，以免重复计数。3、注意调节调节器。4、清洗计数板时切记用硬物洗刷。5、光的亮度的调节