油茶籽壳研究.doc

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1、油茶籽壳研究摘要：研究油茶籽壳中总黄酮类物质的提取工艺，探讨影响提取率的主要因素，通过正交试验确定最佳提取工艺。通过DPPH法﹑FRAP法﹑·OH清除能力3个体系对不同溶剂提取物的体外抗氧化能力进行研究。试验结果表明：在30倍样重的60%乙醇中浸泡后，40℃下超声波辅助萃取45min，油茶籽壳中的总黄酮提取率为1.71%。此外，不同溶剂提取物中黄酮提取率差异很大。在DPPH体系中，油茶籽壳60%乙醇提取物的IC50为781μg/mL，清除能力强于其它溶剂提取物与对照品竹叶提取物（IC50为1025μg/mL，主要成分为竹叶黄酮）（P关键词:油茶籽壳；总

2、黄酮；提取溶剂；抗氧化油茶（camelliaoleifera）是我国特有的木本食用油料树种[1]，其果实油茶籽生长周期长，从开花到采摘，历经冬﹑春﹑夏﹑秋四季，民间素有“抱子怀胎”之称。茶果中，茶蒲占60.0%~61.3%，茶籽占38.7%~40%，茶籽中壳占30.6%~34%，茶仁占66.0%~69.4%。我国油茶资源十分丰富，据统计，全国有油茶36.67万hm2（5500万亩）[2]，每年产油150万t，这将带来1000多万t的油茶籽壳。如此庞大的数量的副产物，若能加以有效利用，将能产生巨大的经济效益。国外曾有从油茶籽油不皂化物中分离三萜醇以及从茶

3、籽饼中分离黄酮和黄酮醇苷[3]的报道。国内有油茶总皂苷具有抗氧化及清除自由基的能力[4]以及茶籽毛油中存在极性抗氧化物质[5]的报道，但从油茶籽壳中提取黄酮并对其进行抗氧化研究截至发稿前未见报道。黄酮类化合物是一类在植物界广泛分布的多酚类天然产物。有研究表明，黄酮类化合物具有抗氧化、抗癌、抗心脑血管疾病、抗炎、抗病毒、免疫调节等多种生理功能及药理作用，其提取物已用于食品、药品、化妆品等中[6]。因此开发利用油茶壳中的黄酮类化合物具有重要的现实意义。为了利用油茶壳中的黄酮类物质，本文借助超声波辅助萃取油茶籽壳总黄酮，通过1，1-二苯基-2-苦基苯肼（DP

4、PH·）法﹑铁离子还原法（FRAP）与羟自由基（·OH）清除能力3个反应体系来评价其抗氧化能力，为油茶籽壳中有效成分的开发利用提供参考。1材料与方法5学海无涯1.1材料油茶籽，2006年11月份采购。将油茶籽敲碎，分离的油茶壳晒干，用粉碎机粉碎，过40目筛。芦丁标准品，中国医药上海化学试剂公司；竹叶提取物（黄酮含量：32%），浙江安吉圣氏生物制品有限公司；1，1-二苯基-2-苦基苯肼自由基（1，1-diphenyl-2-picrylhydrazyl）（DPPH）；无水乙醇、氢氧化钠、亚硝酸钠、硝酸铝等均为分析纯试剂。1.2仪器7530G分光光度计，惠普

5、上海分析仪器公司出品；KQ-250B型超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司出品；电动粉碎机，温岭市大德中药机械有限公司出品。1.3试验方法1.3.1油茶籽壳总黄酮的工艺流程及乙醇提取优化油茶籽壳总黄酮工艺流程：油茶籽壳→晒干→粉碎→溶剂浸泡→超声波辅助萃取→抽滤→定容→定量分析。准确称取1.0g油茶籽壳粉于50mL三角烧瓶中，加入一定量的乙醇，在一定温度下超声波提取一定时间，趁热减压抽滤，用相应浓度的乙醇溶液定容于50mL容量瓶中，即为待测液。1.3.2油茶籽壳总黄酮的分级提取选用极性由弱到强的4种溶剂———石油醚、纯乙醇、60%乙醇、水，分别提取油茶

6、籽壳中的总黄酮。具体操作：准确称取8.0g油茶壳粉于500mL三角瓶中，按物料比1：30加入提取溶剂，50℃下超声波提取45min，趁热减压抽滤，用相应浓度的溶液定容于300mL容量瓶中，即为待测液。1.3.3总黄酮标准溶液的制备和标准曲线绘制以五氧化二磷为干燥剂，减压干燥（60℃，0.09MPa）至恒重的芦丁标准品0.077g，用60%乙醇溶解，定容至250mL，摇匀，得0.2926mg/mL的标准液，放入低温暗箱内，及时检测。分别吸取标准液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mL于25mL容量瓶中，用60%乙醇添至10mL，加入5%NaN

7、O2溶液1.0mL，摇匀，放置6min，再加入10%Al（NO3）3溶液1.0mL，6min后加入4%NaOH溶液10mL，混匀，用30%乙醇定容至刻度，摇匀，放置15min后，在波长510nm处测定吸光度A，得芦丁含量y（mg/mL）与吸光度A之间的回归方程为：y=0.113A+0.0016（R2=0.9993）。5学海无涯1.3.4提取物总黄酮的测定取本文1.3.2节中待测液1mL于25mL容量瓶中，其它操作同1.3.3节，测定其在510nm处的吸光度A。由回归方程计算黄酮提取率。总黄酮提取率（%）=[黄酮类化合物质量（g）/原料质量（g）]×10

8、0%得率（%）=[提取物质量（g）/原料质量（g）]×100%提取物干基黄酮含量（%）=[黄酮