内皮细胞损伤修复论文.doc

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1、内皮细胞损伤修复论文【摘要】目的观察内皮细胞在损伤修复过程中微丝骨架系统的形态结构变化，研究阻断微丝功能对内皮细胞损伤修复的影响。方法以培养单层内皮细胞损伤模型，采用免疫荧光染色和3H-TdR掺入法，研究微丝功能对创面愈合及细胞增殖的影响。结果内皮细胞在损伤修复过程中伴随微丝特殊而有序的变化。用细胞松弛素Ｂ破坏微丝，可不同程度抑制创面的愈合及细胞增殖，并呈一定的时间—剂量依赖关系。结论微丝功能在内皮细胞修复过程中起重要作用，可通过直接或间接效应影响DNA合成，从而影响修复过程。【关键词】内皮细胞创伤

2、愈合细胞骨架Effectsofmicrofilamentsontherepairofendothelialmonolayerswound【Abstract】ObjectiveToobservethemorphologicalchangesofmicrofilaments，andtoinvestigatethewoundclosureandcellproliferationafterthedisruptionofmicrofilaments.MethodsAninvitrowoundmodel，imm

3、unofluorescencemicroscopyand3H-TdRincorporationmethodswereusedinthisstudy.ResultsAspecificandsequentialchangesinmicrofilamentsoccourredduringwoundhealing.WhenthemicrofilamentsweredisruptedwithcytochalasinB，thewoundclosureandcellmigrationweregreatlydela

4、yed.Theendothelialcell3H-TdRincorporationwasalsoinhibited，whichshowedtimeanddosedependentrelationship.ConclusionTheseresultssuggestthatthemicrofilementsystemmightbecriticaltowoundhealing，andthecytoskeletalsystemmightdirectlyorindirectlyparticipateinthe

5、regulationofcellproliferationandwoundhealing.【Keywords】endothelialcellwoundhealingcytoskeleton5学海无涯创伤修复是一个复杂的生物学过程，许多因素参与了这一过程的调节。研究表明，细胞骨架系统（cytoskeletonsystem）不仅决定细胞的形态和运动，还参与控制细胞的生长、分化及细胞内外的信息传递［1］。因此在创伤修复过程中细胞骨架系统可能起着重要作用。微丝系统是细胞骨架的主要成分，本实验拟采用体外培养单

6、层内皮细胞损伤模型，观察微丝在损伤修复过程中的相应变化，以及阻断微丝功能对损伤修复过程及细胞增殖的影响。1材料与方法1.1细胞培养及模型建立参考文献的方法分离和培养人脐静脉内皮细胞［2］，以含20％FCS的DMEM（Gibco）液每2d换液1次。创伤模型的建立参考文献报道［3］，内皮细胞接种在含盖玻片的24孔培养板内，生长汇合成单层内皮细胞后，去除盖玻片中央1.5mm内皮细胞，制成创面。用装有网格测微计的倒置相差显微镜观测创面闭合速度，并计算某时刻创面闭合指数100×［1-(某时刻创缘间宽度/原始创

7、缘间宽度）］。创缘间距离取３处不同点测量，重复３次，取平均数。1.2细胞处理内皮细胞生长汇合成单层内皮细胞后，分为实验组和对照组，每组每种浓度复设12孔。实验组分别在损伤前1h各加入终浓度为0.2μg/ml、0.4μg/ml、0.8μg/ml和1.2μg/ml的细胞松弛素Ｂ（Sigma公司），对照组加等量的培养基。该药物于使用前用含20％FCS的DMEM配制，每2d换液1次并加相应浓度的细胞松弛素B。分别记录不同浓度药物作用下创面闭合速度和时间，以及不同时刻创面闭合指数。1.3微丝的荧光染色分别于损

8、伤前、损伤后不同时间取出培养板内的盖玻片进行染色。以4％多聚甲醛+TritonX-100固定10min，0.1M甘氨酸处理10min，加rhodamine-phalloidin（1∶20，MolecularProbes）染色40min，PBS冲洗3次×3min，加甘油/PBS（1∶1）封片，荧光显微镜观察、拍照。1.43H-TdR掺入量测定用含20％FCS的DMEM悬液以0.2×105/ml细胞密度接种于24孔板，培养至汇合，换成无血清DMEM培养24h后分为实验组和