畜产品实验指导.docx

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1、实验一乳粉中乳糖和蔗糖的测定一、原理：甜乳粉中含有还原性的乳糖及不具还原性的蔗糖，将样品溶解去除蛋白质后，根据直接滴定法测定还原糖的原理，可直接测定乳糖，蔗糖不具还原性，可根据总糖测定原理，用酸水解，测出水解前后转化糖量，可求出蔗糖含量。直接滴定法的原理是，费林甲、乙液等量混合时，立即生成天蓝色的沉淀，它立即与酒石酸钾钠反应，生成可溶性的深蓝色酒石酸钾钠络合物。在加热条件下，样液中的还原糖与酒石酸钾钠络合物反应，生成红色的氧化铜沉淀，达到终点后，稍过量的还原糖把次甲基蓝还原，溶液由蓝色变为无色，显示出氧化铜沉淀的鲜红色。滴

2、定在沸腾条件下进行，使上升的蒸汽阻止空气浸入溶液可防止无色的次甲基蓝隐色体与空气中的氧结合，又变为蓝色染色体。二、试剂1.费林甲液：称取34.64g硫酸铜溶于水中，加入0.5ml浓硫酸，稀释至500ml.2.费林乙液：称取173g酒石酸钾钠和50g氢氧化钠溶于水中，稀释至500ml，静置两天后过滤，备用3.乙酸锌溶液：称取21.9g乙酸锌加3ml醋酸，加水溶解，并稀释至100ml4.10.6%亚铁氰化钾溶液，称取10.6g，亚铁氰化钾，加水溶解，并稀释至100ml.5.1%次甲基蓝乙醇溶液6.（1：1）盐酸溶液7.30%氢

3、氧化钠溶液8.0.02%甲基红乙醇溶液：取0.2g甲基红，溶于100ml20%乙醇溶液中三、操作方法1.费林液的标定（1）用乳糖标定称取预先在95℃电热干燥箱干燥2h的纯乳糖0.75g(准确到0.2mg)，用水溶解，并稀释至250ml容量瓶内，摇匀，装入滴定管备用。分别吸取费林甲和乙液各5ml于150ml锥形瓶中，加入玻璃珠2粒，从滴管滴加糖标准液15ml，置电炉上加热，使其在2min内沸腾，保持沸腾状态15s，加入次甲基蓝溶液3滴，边沸腾边以每两秒一滴的速度滴加，至溶液中蓝色刚好褪尽为止，读取后用乳糖标准液的体积数，求出

4、有乳糖时费林试液的校正值（f1）V1×g1×1000A1=×4×V1×g1250A14×V1×g1f1=×AL1AL1式中：A1——实测乳糖数，mgV1——滴定时消耗乳糖标准溶液的体积数，mlg1——称取乳糖质量，gAL1——由服糖滴定毫升数查表所得的乳糖数，mg（2）由蔗糖标定称取在105℃电热干燥箱中干燥2h的蔗糖0.2g，用50ml水溶解，并移入100ml容量瓶中，定容，摇匀。吸取50ml上述蔗糖标准溶液于100ml容量瓶中，加20ml水，再加入10ml(1:1)的盐酸，置75℃水浴锅中不时摇动，在2min45S之间

5、使瓶内升温至67℃，自达到67℃后继续在水浴中保持5min，于此时间内使其其升到69.5℃，取出用冷水冷却。当瓶内温度冷却至35℃时，加甲基红指示济2滴，用30%氢氧化钠中和至中性，冷却至20℃，用水稀释至刻度，摇匀，并在此温度下温温30min。再按照乳糖标定费林液操作，得出滴定10ml费林流所消耗的转化糖液的体积数，求出测蔗糖时费林试液的校正值V2×g2×100050V2×g2×1000A2====5.2631×V2×g2100×0.95100200×0.95A25.2631×V1×g1f2==AL2AL2式中：A2——

6、实测转化糖数，mgV2——滴定时消耗转化糖标准溶液的体积数，mlg2——称取蔗糖质量，gAL2——转化糖液滴定毫升数查表所得的转化糖数0.95——1克蔗糖相当于0.95克转化糖2.乳糖测定方法（1）样品处理称取甜乳粉样品5g，用100ml水分数次溶解，洗入250ml容量瓶中加5ml乙酸锌溶液，再加入5ml亚铁氰化钾溶液，每次加入试剂时要缓缓加入，并摇动容量瓶，最后用水稀至刻度，摇匀，静置数分钟后，用干燥滤纸过滤，弃去最初25ml滤液，所得样液装入滴定管内作测定用。(2)预备测定吸取费林甲乙液各5ml和10ml水，置于150

7、ml锥形瓶中，加加玻璃珠2粒，再从滴定管中滴加样品溶液15ml，置电炉上加热，使其在2min内沸腾，保持沸腾状态15s，加入次甲基蓝溶液3滴，徐徐滴入样流至蓝色完全褪尽为止。读取消耗样液体积的毫升数。（3）精密滴定吸取费林甲乙液各5ml和10ml水，置于150ml锥形瓶中，加加玻璃珠2粒，再从滴定管中加入比预备滴定量少1-1.5ml样品溶液，置电炉上加热，使其在2min内沸腾，保持沸腾状态2min，加入次甲基蓝溶液3滴，徐徐滴入样流至蓝色完全褪尽为止。以此滴定量作为计算的依据。平行试验时，消耗量相关不应超过0.1ml。(4

8、)计算F1×f1乳糖（%）=×100%V3×W/250×100式中：W——样品质量gV3——滴定消耗样液体积数，mlF1——由消耗样液毫升数查表所得乳糖数，mgf1——费林试液乳糖校正值3.蔗糖测定方法（1）转化前转化糖量的计算利用测定乳糖时的滴定体积数，从表中查出相应的转化糖量。F2×f2L2转化前转