资源描述：
《鸡体抗传染性法氏囊病病毒天然免疫基因的miRNA调控机制.docx》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、鸡体抗传染性法氏囊病病毒天然免疫基因的miRNA调控机制传染性法氏囊病(InfectiousBursalDisease,IBD)是由传染性法氏囊病病毒(InfectiousBursalDiseaseVirus,IBDV)引起的一种高度危害养鸡业的传染病。天然免疫(innateimmunity)是机体防御病原体感染的第一道防线,在启动机体的获得性免疫应答中起着十分重要的作用。microRNA(miRNA)是一种21-25nt的小分子RNA,是基因表达的调控子,本研究以IBDV为模式病毒,探讨了miRNA在机体中调控干扰素、p53和模式识别受体抗IBDV天然
2、免疫的分子机制。1传染性法氏囊病病毒对鸡法氏囊组织中干扰素和p53转录的影响为了分析传染性法氏囊病病毒(IBDV)感染鸡体内干扰素和p53转录水平差异变化,用IBDV弱毒(B87)和强毒(QL/12)分别感染4周龄SPF鸡,每隔12h时(12～84h)取3只鸡的法氏囊组织混合匀浆,用荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)检测其感染前后干扰素(IFN)和p53的mRNA水平,同时分析法氏囊组织的病理变化和病毒载量。结果显示:QL/12组,IFN-αα和IFN-βmRNA水平随着时间的增加逐渐升高,48h达到峰值,随后降低;IFN-γmRNA水平随着时间的增
3、加逐渐升高,60h达到峰值,随后逐渐降低;p53mRNA含量迅速升高,60h达到峰值(比正常SPF鸡高约90倍),随后降低。B87组,IFN-αmRNA水平先降低后升高(48h达到最低值),而IFN-βmRNA水平变化不规则,72h含量最高;IFN-ymRNA水平先逐渐升高后降低(72h达到峰值);p53mRNA含量变化较小,36h含量最高(比正常SPF鸡高约5倍);QL/12组诱导法氏囊组织产生的IFNmRNA(IFN-α、IFN-β和IFN-γmRNA)以及p53mRNA水平均显著高于B87-IBDV组。病理组织学检查可见:与正常对照组相比,QL/1
4、2组法氏囊淋巴滤泡呈不同程度的损伤,B87组法氏囊组织未见明显的组织病变。qRT-PCR检测IBDV病毒载量,QL/12组法氏囊组织中病毒含量48h达到峰值(8.4×106copies/mg),而B87组法氏囊组织中病毒含量72h达到峰值(6.6×104copies/mg)。本研究为分析鸡体内IFN和p53介导的抗IBDV天然免疫中的作用奠定了基础。2鸡p53抑制传染性法氏囊病病毒复制及gga-miR-2127对其调控机制传染性法氏囊病(InfectiousBursalDisease,IBD)是由传染性法氏囊病病毒(InfectiousBursalDis
5、easeVirus,IBDV)引起的一种高度危害养鸡业的传染病。肿瘤抑制蛋白p53能够抑制多种病毒的复制,但对IBDV复制的影响仍然不清楚。本研究以IBDV为模式病毒,采用体外感染模式,在IBDV感染的DF-1细胞中,p53的表达水平和活性均显著升高。p53过表达可以抑制IBDV的复制,并激活鸡体抗病毒天然免疫基因(IPS-1、IRF3、PKR、OAS、Mx)的表达水平上调;p53抑制表达则得到相反的结果;表明p53可以激活鸡体的抗病毒天然免疫反应发挥抗IBDV感染作用。用生物信息学方法和双荧光素酶报告系统分析发现gga-miR-2127可以作用于p53
6、的3’UTR;qRT-PCR和免疫印迹分析表明gga-miR-2127可以使p53的蛋白水平表达降低,但mRNA水平没有变化;gga-miR-2127过表达可以使鸡体的抗病毒天然免疫基因表达降低,IBDV复制水平升高。本研究表明:gga-miR-2127可以作用于p53的3’UTR调控p53的表达来发挥抗IBDV感染的作用。3gga-miR-9*靶向IRF2促进传染性法氏囊病病毒复制的分子机制为研究gga-miR-9*对传染性法氏囊病病毒(IBDV)复制的影响,本研究用化学合成的方法合成gga-miR-9*的模拟物gga-miR-9*mimics,转染D
7、F-1细胞,24h后,接种IBDV,48h后,收集细胞培养上清液,测定IBDV的滴度,结果显示,gga-miR-9*mimics能够促进IBDV的复制。通过对病毒感染后的IFN检测分析,发现gga-miR-9*可负调控干扰素(IFN)的产生;进一步用生物信息学方法和双荧光素酶报告系统分析验证,gga-miR-9*可靶向调控干扰素调控基因2(IRF2)。用westernblot和qRT-PCR分析,gga-miR-9*mimics转染的DF-1细胞中IRF2蛋白和mRNA水平均比正常DF-1细胞显著降低,将细胞中的IRF2基因敲除,IBDV复制滴度((10
8、625TCID50/0.1mL))显著高于miRNA对照组((10525TCID
