网膜素通过AkteNOS通路调控ARDS肺微血管内皮细胞屏障的机制研究.docx

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1、网膜素通过Akt/eNOS通路调控ARDS肺微血管内皮细胞屏障的机制研究研究背景和目的:肺部炎症反应爆发和肺微血管内皮屏障通透性增高是ARDS的病理生理特点。网膜素是一种目前新近发现的与炎症反应、脂肪堆积密切相关的脂肪细胞因子。研究已证实网膜素具有抗炎、抗凋亡、抗氧化、增加胰岛素抵抗等多种生物学效能,在多种肥胖相关血管疾病中扮演保护性角色。但其与ARDS的关系尚未见相关研究报道。本研究拟探讨网膜素对ARDS的调控效应及潜在机制,为ARDS的诊治提供新思路。研究方法:检测ARDS患者及健康受试者外周血血浆网膜素水平,并评估其在ARDS中的临床意义。体内实验用

2、转染表达人网膜素腺病毒(adenoviralvectorexpressingomentin,Ad-omentin)的野生型C57BL/6小鼠构建ARDS小鼠模型,并检测炎症反应及血管通透性相关指标,探讨网膜素对ARDS的调控效应。体外实验用重组人网膜素预处理人肺微血管内皮细胞(humanpulmonarymicrovascularendothelialcells,HPMECs),检测炎症反应、内皮细胞屏障相关指标,并进一步探讨潜在分子学机制。结果:1.临床研究示,与健康受试者比较,ARDS患者血浆网膜素水平显著降低。进一步分层分析示,死亡组网膜素水平显著低

3、于生存组,中重度组网膜素水平显著低于轻度组。相关分析示,ARDS患者血浆网膜素水平与白细胞数及降钙素水平成负相关,与患者机械通气时间、RICU入住时间无显著相关性。2.体内实验证实,预先转染表达人网膜素的腺病毒可显著抑制ARDS小鼠肺组织炎症反应,减轻肺血管内皮细胞损伤,降低肺血管通透性,维持粘附连接蛋白β-catenin和VE-cadherin及细胞肌动蛋白骨架的稳定。3.体外实验证实,重组人网膜素预处理可减轻LPS诱导的肺血管通透性增高,稳定HPVECs粘附连接蛋白β-catenin和VE-cadherin的表达,减轻肌动蛋白骨架重构,降低Src激酶磷

4、酸化水平,同时重组人网膜素预处理亦可降低LPS引起的内皮细胞凋亡水平及caspase3剪切活化水平,且部分缓解内皮细胞分化障碍,但对内皮细胞迁移无显著影响。4.体内外实验均证实,网膜素处理可提高Akt、GSK-3β、eNOS磷酸化水平。分别予以LY294002和L-NAME抑制Akt/eNOS信号通路,可显著消弱网膜素介导的肺血管内皮屏障保护效应。结论:我们发现,网膜素可通过抑制肺组织炎症反应及减轻内皮细胞屏障障碍,从而对ARDS发挥保护性调控,其机制至少部分通过激活Akt/eNOS信号通路,为ARDS诊治提供新思路。