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《羟基喜树碱与槲皮素联合用药纳米混悬剂的体内外抗肿瘤活性研究.docx》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、羟基喜树碱与槲皮素联合用药纳米混悬剂的体内外抗肿瘤活性研究化疗是目前癌症治疗的有效手段之一,而化疗药物则普遍存在一个共同缺陷,毒副作用大且往往容易产生多药耐药性,因此,在保证已有化疗药物药效的同时,降低它的毒副作用,则成为目前肿瘤治疗领域发展的新方向。为解决肿瘤细胞的多药耐药性,临床上通常采用联合用药的方式。在此背景下,本课题以羟基喜树碱和槲皮素为模型药物,旨在制备一种增效减毒的联合用药纳米混悬剂。本课题首先通过MTT实验对羟基喜树碱和槲皮素的联合用药最佳比例进行筛选,在控制总药量相同的情况下,研究耐药肿瘤细胞（A549/PTX）在不同药物比例下培养24小时后的细胞活性,结果发
2、现当槲皮素和羟基喜树碱质量比为2:3时,具有较好的杀伤作用,由此确定了最佳的联合用药比例为槲皮素:羟基喜树碱=2:3。以聚乙二醇胺（NH2-PEG-NH2）为引发剂,引发L-天冬氨酸-4-苄酯-N-羧基环内酸酐（BLA-NCA）开环缩合,得到不同嵌段比的两亲性三嵌段共聚物聚天冬氨酸苄酯-聚乙二醇-聚天冬氨酸苄酯（PBLA-PEG-PBLA）,通过核磁、红外等手段证实嵌段共聚物的合成。以此类共聚物为稳定剂,羟基喜树碱和槲皮素为模型药物,采用微沉淀-高压匀质法制备了联合用药纳米混悬剂,通过单因素考察法对稳定剂嵌段比、稳定剂与药物比和匀质压
3、力进行考察,确定了最优条件为:稳定剂嵌段比为1:15,稳定剂与药物比为2:1,匀质压力:250bar5次、500bar5次、900bar25次。按照最优条件分别制备了羟基喜树碱纳米混悬剂（HCPT-NPs）、槲皮素纳米混悬剂（QUR-NPs）和联合用药纳米混悬剂（HQ-NPs）,所得三种纳米混悬剂的平均粒径在200nm左右,PDI约为0.2。储存稳定性、稀释稳定性、血浆稳定性结果表明,三种纳米混悬剂在不同条件下的稳定性相对较好。利用差式扫描量热分析（DSC）和X-射线粉末衍射（XRD）研究表明,羟基喜树碱和槲皮素制备成纳米混悬剂后,晶型发生了一定程度的改变。通过溶血实验证实制备
4、的纳米混悬剂可以通过静脉注射给药,不会产生溶血现象。通过MTT法考察了空白材料对正常肝细胞HL-7702的细胞毒性,结果表明空白材料生物相容性良好,无明显毒性;此外,考察了HCPT-NPs、QUR-NPs、HQ-NPs和联合游离药物对耐药肿瘤细胞A549/PTX和非耐药肿瘤细胞HepG2作用24h后的细胞毒性,结果发现,联合用药对于耐药肿瘤细胞表现出良好的杀伤作用。推测是由于槲皮素抑制了耐药肿瘤细胞中P-gp的过度表达,减少了药物的排出,导致了较好的抗肿瘤效果。为此,进一步测定了HQ-NPs和HCPT-NPs对A549/PTX作用相同时间后,A549/PTX细胞对羟基喜树碱的摄
5、取含量,结果发现,HQ-NPs组中羟基喜树碱摄取量从0.5h到2h的增加量约为HCPT-NPs组的2倍。最后通过给药后小鼠肿瘤体积的变化可以看出,QUR-NPs组的抗肿瘤效果相对较弱,HCPT-NPs组和HQ-NPs组对肿瘤作用较好,肿瘤体积增长较少,且两者没有明显差异。然而HCPT-NPs组在治疗过程中,小鼠体重下降明显,小鼠死亡率达到50%,其他组无小鼠死亡。胸腺指数、脾脏指数结果显示,各组小鼠在同等给药剂量的条件下,HCPT-NPs组的胸腺指数和脾脏指数分别为4.31±0.29和1.38±0.09,均低于生理盐水组的胸腺指数和脾脏指数6.50±0.82和2.52±0.67
6、,而HQ-NPs组的胸腺指数和脾脏指数分别为7.25±0.82和3.07±0.55,高于生理盐水组,表明HCPT-NPs组引起了免疫组织损伤,导致脾脏指数较低,而HQ-NPs组由于槲皮素对于免疫器官具有一定的保护作用,H&E染色切片也证实HQ-NPs组减小了药物对组织的损伤。本课题将羟基喜树碱与槲皮素联合使用,利用槲皮素的抗耐药作用抑制耐药肿瘤细胞中P-gp的过度表达,减少细胞对于羟基喜树碱的排出,从而达到较好的抗肿瘤效果。此外槲皮素可以对组织器官起到一定的保护作用,两者联合,可在达到较好抗肿瘤效果的同时,减小药物的毒副作用。
