辽东楤木叶总皂苷抗人乳腺癌作用及其毒性研究.docx

《辽东楤木叶总皂苷抗人乳腺癌作用及其毒性研究.docx》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、辽东楤木叶总皂苷抗人乳腺癌作用及其毒性研究目的：通过对辽东楹木叶总皂苷的药效学和毒理学研究,探讨其体内外抗肿瘤作用、作用机制及其药物安全性。方法：①通过MTT法检测总皂苷体外对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响；Hoechst33258染色和AnnexinV-FITC／PI双染法检测总皂苷对MCF-7细胞凋亡及对细胞形态的影响；Fluo.3AM染色法检测总皂苷对细胞内钙离子分布变化的影响；免疫印迹法检测总皂苷对activecaspase-9,activecaspase-3,Bax,cleavedPAR

2、P,Pro-caspase-9,Pro-caspase-3,Bcl-2,PARP,ERK1/2,P-ERK1/2,P38,P-P38,JNK,P-JNK,Grp78/Bip,PERK,ATF-6α,IRE1α,Pro-caspase-4,PERK,P-PERK,eIF2α,P-eIF2α,ATF-4andChop蛋白表达的影响；免疫印迹法检测P38,JNK,ERK抑制剂预先作用后,总皂苷对相应蛋白表达的影响：建立裸鼠乳腺癌模型,检测总皂苷的体内抗肿瘤作用及对免疫器官的影响；Tunel染色法检测各给药

3、组瘤组织中细胞凋亡情况；免疫组织化学染色法检测各给药组瘤组织中activecaspase一9,activecaspase一3蛋白表达情况。②在长期毒性研究中,Beagle犬口服总皂苷(50,100,200mg/kg)12周,停止给药后,继续观察4周。实验期间,记录临床毒性症状,死亡情况,行为学变化,体重变化,食物消耗量和体温变化情况。检测心电指标,尿液指标,血液学指标,血清生物化学指标和脏器重量变化情况。同时,进行眼科检查和各脏器的组织病理学检查。结果：①辽东楤木叶总皂苷可明显抑制MCF-7细胞增殖

4、和诱导细胞凋亡,并呈现明显的剂量依赖性；辽东楤木叶总皂苷作用后,MCF-7细胞出现明显的凋亡形态；辽东楤木叶总皂苷作用后,细胞浆内钙离子浓度增加；辽东楤木叶总皂苷可明显的上调activecaspase-9,activecaspase-3,Bax,cleavedPARP,P-ERK1/2,P-P38,P-JNK,Grp78/Bip,P-PERK,P-eIF2α,ATF-4andChop蛋白表达和下调Pro-caspase-9,Pro-caspase-3,Bcl-2,PARP,PERK,ATF-6α,P

5、ro-caspase-4,PERK和eIF2α蛋白表达,而对IRE1α蛋白表达无影响；体内实验表明,辽东楤木叶总皂苷具有较强的体内抗肿瘤作用,对脾脏的相对重量无明显影响；Tunel染色结果表明,与模型组比较,各给药组瘤组织中Tunel阳性细胞数均显著增加；免疫组织化学染色结果表明,与模型组比较,各给药组瘤组织中activecaspase一9,activecaspase一3阳性细胞数均显著增加。②长期毒性研究表明,与模型组比较,给药期间,高剂量组动物体重和食物消耗量均显著下降。恢复期时,体重和食物消耗

6、量均逐渐恢复正常；给药和恢复期间,动物体温均无明显变化;给药期间,高剂量组动物出现恶心、呕吐、稀便等不良反应。恢复期时,未发现上述不良反应；与模型组比较,给药和恢复期,在血液学、血清生物化学、尿液参数、心电参数上一些指标发生的变化并无毒理学意义；组织病理学分析结果表明,各脏器和组织并未发现与药物直接相关的病理变化。结论：①辽东楤木叶总皂苷具有明显的体内外抗乳腺癌作用,其机制与诱导细胞凋亡、激活胞内线粒体、内质网凋亡通路和胞外丝裂原活化蛋白激酶通路有关。②Beagle犬口服辽东楤木叶总皂苷重复给药90

7、天,未见明显与给药相关的毒性病理改变,停药4周后,未见明显与给药相关的延迟或蓄积毒性病理改变。在200mg/kg剂量下,动物摄食量减少,体重降低,出现较明显的胃肠道反应,但停药后可恢复。未见毒性反应剂量为100mg/kg.。