欧前胡素抗炎作用和尾叶香茶菜丙素抗肿瘤作用机制研究.docx

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1、欧前胡素抗炎作用和尾叶香茶菜丙素抗肿瘤作用机制研究目的:NF-κB与HIF-1α参与炎症反应、肿瘤细胞的增殖、凋亡与血管生成等多种生物进程。长白山药用植物白芷中分离出的欧前胡素以及尾叶香茶菜中分离出尾叶香茶菜丙素分别以NF-κB与HIF-1α信号为药物作用靶点,从细胞和分子水平深入研究其干预炎症与肿瘤发生、发展的分子机制,为抗炎、抗肿瘤药物的开发提供可靠的科学依据。方法:(1)荧光素酶报告基因与MTT实验检测欧前胡素对NF-κB转录活性及细胞存活率的影响;免疫荧光实验与蛋白免疫印迹检测欧前胡素对p65及COX-2、cyclinD1、MMP-

2、9、VEGF、IL-6、Bc1-xL、p-IKKα/β、p-Akt、caspases-8、PARP蛋白表达的影响;RT-qPCR与ELISA实验检测了欧前胡素对mRNABcl-xL、mRNAIL-6、mRNATNF-α及细胞分泌物MMP-9、IL-6的影响;凋亡和ROS实验检测了欧前胡素对细胞凋亡及细胞内ROS的影响;(2)荧光素酶报告基因与MTT实验检测尾叶香茶菜丙素对HIF-1α转录活性及细胞存活率的影响;蛋白免疫印迹与免疫荧光实验检测尾叶香茶菜丙素对肿瘤细胞中HIF-1α蛋白表达的影响;RT-PCR与ELISA实验检测了尾叶香茶菜丙素

3、对HIF-1αmRNA、VEGFmRNA、EPOmRNA以及细胞上清液中VEGF的影响;流式细胞术及裸鼠体内移植瘤实验分别检测了尾叶香茶菜丙素对细胞周期及体内移植瘤的影响。结果:(1)欧前胡素剂量依赖性的抑制了TNF-α诱导的NF-κB下游靶基因的表达;欧前胡素促进TNF-α诱导的细胞凋亡;欧前胡素抑制了HeLα细胞中PI3K/Akt的活化,IKKα/β的磷酸化,IκBα的降解以及P65的核转移,并呈剂量依赖关系抑制活性氧ROS的含量。(2)尾叶香茶菜丙素对缺氧诱导条件下不同肿瘤细胞中HIF-1α呈剂量依赖性抑制并抑制HIF-1α蛋白的合成

4、,对其降解和HIF-1αmRNA的表达并无影响;尾叶香茶菜丙素可有效抑制HIF-1α靶基因VEGF、EPO及GLUT1的表达;尾叶香茶菜丙素能够抑制裸鼠体内肿瘤细胞的生长,并且对肿瘤组织中HIF-1α的表达呈明显的抑制作用。结论:(1)欧前胡素通过抑制由TNF-α诱导的ROS/PI3K/Akt/NF-κB信号通路起到抗炎作用;(2)尾叶香茶菜丙素可以抑制肿瘤细胞中HIF-1α的表达及裸鼠体内移植瘤的生长。