猪Mx1蛋白抗PRRSV作用及其分子机制初探.docx

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1、猪Mx1蛋白抗PRRSV作用及其分子机制初探猪繁殖与呼吸综合征（Porcinereproductiveandrespiratorysyndrome,PRRS）是目前中国国内乃至全球范围养猪业中一种较为严重的病毒性传染性疾病,主要以引起母猪的繁殖障碍症状和仔猪的呼吸道疾病为特征。该疾病是由蓝耳病毒（PRRSV）引起,于1987年首次在北美被发现,随后便在世界范围内迅速而广泛传播,给全球的养猪业造成了极为巨大的的经济损失。然而目前该病并没有行之有效的科学的治疗手段,主要以预防为主。宿主细胞的抗PRRSV机制的研究能够为PRRS的防控及新型疫苗的研发提供新的思路和方法。本实验室成员已做的蛋白质组学

2、iTRAQ技术研究结果表明,猪外周血单核树突状细胞（MoDCs）感染高致病性PRRSV后,在较长一段时间内,猪Mx1蛋白的表达显著上调。那么Mx1蛋白是否具有抗PRRSV的功能?其机制又是什么?为此,我主要进行了以下几个方面的研究:1、猪Mx1蛋白的抗PRRS病毒活性我构建了Mx1蛋白及其分段蛋白的质粒,通过TCID₅₀试验,我证明了猪Mx1蛋白可以大大降低PRRSV的滴度,表明Mx1蛋白具有显著的抑制PRRSV增殖的活性,其中,Mx1蛋白的G结构域发挥了主要的抗病毒作用。绝对荧光定量试验结果进一步证明,Mx1蛋白可以显著降低PRRSVgRNA水平,其中,G结构域发挥了

3、主要作用。2、Mx1蛋白的G结构域与PRRSV的核衣壳蛋白N的C末端结构域互作为了探究Mx1蛋白与PRRSV的蛋白的相互关系,我构建了PRRSV所有结构蛋白与非结构蛋白的表达载体。通过RenillaLuciferaseAssay（RLA）试验,成功筛选到了与Mx1互作的N蛋白,同时也筛选到与N蛋白互作的是Mx1蛋白的G结构域。随后我通过免疫共沉淀试验（Co-IP）辅助证明了这些结果。将N蛋白进一步分段后,Co-IP证明了G结构域与N蛋白的C末端结构域（NC）互作。3、Mx1蛋白的G结构域与N蛋白C末端结构域共定位于细胞质我将Mx1、Mx1突变体、G结构域的质粒分别与PRRSVN蛋白、N蛋白N

4、端（NN）、N蛋白C端（NC）、N蛋白NLS突变体质粒共转染HEK-293T细胞,通过间接免疫荧光试验（IFA）证明,Mx1与N蛋白、G蛋白与NC蛋白可以共定位于细胞质,表明Mx1蛋白可能主要在细胞质中发挥抗病毒作用。综上所述,本研究首次初步揭示了猪Mx1蛋白抑制PRRSV增殖的分子机制,即猪Mx1蛋白在细胞质中通过G结构域与N蛋白的C端结构域互作,绑定到病毒衣壳蛋白N上,进而抑制了PRRSV的增殖,降低病毒滴度。本研究结果扩充了Mx1蛋白抗病毒分子机制的多样性,并为预防和控制PRRSV感染提供了新的思路和方法。