agilent hplc使用过程中常见问题及解决方法

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1、AgilentHPLC使用过程中常见问题及解决方法From：http://antpedia.com/html/47/n-5647.html一、如何处理HPLC中的盐带来的问题？很多问题是由于流动相含有盐成分造成的。建议在清洗时将水加热后再冲洗，这样既可以将盐溶解的更好，也可以溶解一些脂溶性物质，会减少很多问题的发生,包括管路堵塞,盐析出，基线噪音……二、安捷伦1100及1200液相泵的日常维护  泵是液相色谱的核心，泵将流动相从溶剂瓶输送到液相流路系统中，并要在高压下保持流量和压力的稳定。泵的状态正常是液相色谱准确分析的基础，所以平日一定要

2、重视对泵的维护。下面就安捷伦1100/1200液相色谱泵的日常维护进行简要的介绍。1.流动相的准备为了防止颗粒性物质对泵组件的磨损，流动相（特别是水相）应该新鲜配置并且过滤。上机前对流动相进行适当的超声脱气，以保证更好的在线脱气和在线混合的效果。2.比例阀溶剂通道的分配四元泵的比例阀有A、B、C、D四个通道，建议将盐溶液接在下面的通道（A或D），将有机溶剂接在上面的通道（B或C）上,也就是有机通道最好在盐溶液通道的上面。且建议用水定期冲洗所有比例阀通道除去可能在阀口析出的盐结晶。3.过滤白头的维护过滤白头位于排气阀内，是一种聚四氟乙烯材质的

3、微孔过滤芯，用于过滤流动相中的微粒，是经常需要维护的地方。当系统压力有异常增高时，首先需要检查过滤白头是否阻塞了。判断的方法是：打开排气阀，以纯水作流动相，将流速设为5mL/min，如果泵压超过10bar，则说明过滤白头需要更换了。对过滤白头的预防性维护通常可以是1~2个月更换1次，更换时同时检查一下过滤白头前面的密封金垫，如果发现变形，也应及时更换。如果过滤白头更换过于频繁，则需要认真检查一下流动相的品质，确保流动相上机前过滤，确保使用了合适的过滤膜。如果流动相有长菌现象，除了配置新的溶剂，还应对相应的溶剂管线和脱气机通道进行彻底的清洗。

4、4.柱塞杆与柱塞密封圈的维护柱塞密封圈套在柱塞杆上用于隔离泵与外界，工作时，它和柱塞杆进行频繁的往复摩擦，使用一段时间后，会有一定的磨损，因而密封圈需要定期更换以保证系统的密封性。更换活塞密封垫时检查活塞杆上是否有划痕。有划痕的活塞将导致轻度渗漏，并降低密封垫的使用寿命。应尽早更换有划痕的活塞。柱塞密封圈有反相和正相之分，反相密封圈为黑色，石墨Teflon材质；正相呈橘黄色，聚乙烯材质，更适用于正相溶剂。1100/1200标配的是反相密封圈，正相应用时，需要更换为正相密封圈。盐溶液对柱塞密封圈的寿命有着很大的影响，使用有盐溶液作为流动相的体

5、系时，要注意盐溶液通道的清洗，千万不能让盐溶液在系统中过夜，常常一个晚上析出的盐粒就会造成系统堵塞，对泵产生较大的损害。为了延长密封圈和柱塞杆的寿命，在经常使用较高浓度的缓冲盐溶液的情况下，建议安装柱塞清洗附件。柱塞清洗的原理在于：柱塞泵在工作时，虽然有密封圈密封，但由于毛细作用，还是会有一些流动相渗入到密封圈与柱塞杆之间。如果流动相中有缓冲盐，当柱塞杆壁上的溶剂挥发掉后，极细小的盐粒留了下来。这样的盐粒就象砂纸一样磨损着柱塞杆和柱塞密封圈，会大大降低柱塞杆和密封圈的寿命。柱塞清洗附件是在柱塞杆的中间加入了一个可以有水流过的腔体，通过水不断

6、的流动，就可以带走渗进来的盐溶液，防止了盐粒的析出，保护了柱塞杆和柱塞密封圈。通常我们往柱塞清洗的水里加入10％的异丙醇，可以减小水的张力，便于清洗液流动，并且抑制长菌。但有一点要注意的是，装有柱塞清洗附件的泵头，清洗液流量可以很小（如每分钟几滴），但一定不要让清洗通道里干涸，如果水流光了，应该尽快换上新的溶液。否则会减少柱塞杆和密封圈的寿命。       5.主动阀的维护   主动阀是流动相进入泵体的门户。如果我们发现流量为零，流量不稳，或泵压波动特别大，常常都是因为主动阀漏或是堵了。主动阀里面装有一个小的单向阀芯，我们将其取下，在异丙醇

7、内超声清洗一下，一般能解决这样的问题。如果超声不能解决问题的话，可以更换该阀芯。对于经常使用缓冲盐体系的用户，手头常备一个这样的阀芯是非常有用的，往往可以及时解决问题，大大的降低停机带来的损失。         6．出口阀的维护   出口阀内部也有，如果有盐粒或其它杂质渗入其中，也会造成出口阀的堵或漏，常常表现为压力的异常波动。通常我们可以用异丙醇或60度左右的热水冲洗系统，如果无效，在异丙醇中超声清洗它常常会解决这样的问题。　三、保留时间重现性不好，可能的原因有哪些？保留时间不重现还会影响到峰面积的重现性，导致实验无法进行。引起这种现象因

8、素很多，建议检查以下几个方面：-确认流动相是新鲜配置的，比例没有错误。-确认色谱柱是好的。-检查一下溶剂瓶里的溶剂过滤器没有长菌，没有被堵塞。-如果使用梯度洗脱方法，请确认平衡时