血吸虫病肝纤维化治疗论文.doc

《血吸虫病肝纤维化治疗论文.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、血吸虫病肝纤维化治疗论文【摘要目的摘要：探索维生素E(VitE)抗小鼠日本血吸虫病肝纤维化功能及其机制.方法摘要：用日本血吸虫尾蚴皮肤敷贴法感染小鼠，构建日本血吸虫病肝纤维化模型，以肝纤维化达Ⅱ级或Ⅱ级以上作为开始VitE治疗标志.实验分5组摘要：正常对照组、模型组及VitE高、中、低剂量组(每日150,50,5mg/kg),8wk末处死动物，HE和VG染色对肝组织进行病理学检查，分光光度法检测肝组织丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性，免疫组化SP法检测肝星状细胞(HSC)标记物α平滑肌动蛋白(αSMA)表

2、达，RTPCR方法检测肝脏α1(I)型前胶原mRNA表达.结果摘要：VitE降低模型组肝脏MDA含量［(5.00±0.31)μmol/gvs(11.66±1.84)μmol/g,P%26lt;0.05］，提高SOD活性［(249.84±26.22)μkat/gvs(120.11±42.61)μkat/g,P%26lt;0.05］；减少αSMA阳性表达［(0.41±0.02)vs(0.68±0.02),P%26lt;0.05］；降低肝脏胶原含量［(0.23±0.01)vs(0.60±0.11),P%26lt;0.05］和α1

3、(I)型前胶原基因表达［(0.28±0.01)vs(0.85±0.15),P%26lt;0.05］.结论摘要：VitE具有抗小鼠日本血吸虫病肝纤维化功能，其机制和抗脂质过氧化功能、抑制HSC活化和增殖、降低α1(I)型前胶原基因表达和胶原合成有关.【血吸虫病，日本；肝硬化；维生素E；氧化性应激；肝星状细胞；胶原I型日本血吸虫病是我国危害最大的寄生虫病之一，而肝纤维化是日本血吸虫病致死和形成严重并发症最重要的原因.探究表明，在血吸虫病肝纤维化形成过程中，氧化应激发挥重要功能，参和血吸虫对宿主的损伤，自由基可能是血吸虫病主要的

4、致病因素［1］.VitE作为机体防御氧化应激损伤的重要抗氧化剂，已应用于治疗肝纤维化，但有关VitE抗日本血吸虫病肝纤维化功能的探究国内外报道甚少，而VitE治疗血吸虫病肝纤维化的功能机制尚未见文献报道.我们观察VitE抗日本血吸虫病肝纤维化功能，探索其机制如下.1材料和方法71.1材料健康雄性昆明小鼠(18～22)g及日本血吸虫尾蚴阳性钉螺(湖北省血吸虫病防治探究所)，皮肤敷贴法感染日本血吸虫尾蚴（20±1）条/只，于感染后8,10,12wk末分别处死6只小鼠后取肝组织进行病理学检查，以肝纤维化达Ⅱ级或Ⅱ级以上作为Vit

5、E开始治疗的标志，即在12wk末开始给予VitE治疗.32只感染小鼠分为4组，每组8只摘要：1组，模型组；2组，VitE高剂量组(VitE每日150mg/kg)；3组，中剂量组(50mg/kg)；4组，低剂量组(5mg/kg).VitE胶丸由厦门鱼肝油厂生产，剪破胶丸，用蒸馏水配制所需浓度的混悬液，灌胃给药每日1次，连续8wk.另取同一批健康小鼠10只作为正常对照组.丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶（SOD）测定试剂盒(南京建成生物工程探究所)，免疫组化所用试剂(北京博奥申生物技术有限公司)，TRIzol(美国Invitr

6、ogen)，逆转录试剂盒(美国Promega)，Taq酶(Gibco公司).α1(I)型前胶原引物序列参照GenBank，上游序列摘要:5′GAGCGGAGAGTACTGGATCG3′，下游序列摘要:5′TGCTGTAGGTGAAGCGACTG3′，扩增片段为419bp；内参照βactin引物上游序列摘要:5′TGTCACCAACTGGGACGATA3′，下游序列摘要:5′AGGTCTTTACGGATGTCAACG3′，扩增片段为654bp，引物由北京奥科生物技术有限公司合成.1.2方法断颈处死小鼠，取肝右叶相同部位肝组织

7、2块，1块于-70℃保存，测定肝组织匀浆MDA含量、SOD活性及肝脏α1(I)型前胶原基因表达；1块固定于100mL/L中性甲醛，石蜡包埋，行HE和VG及αSMA免疫组化染色.1.2.1肝组织病理学及纤维化评分常规行HE和VG染色，光镜下观察肝小叶病理变化及肝纤维化程度分级摘要：0级20=1，正常；Ⅰ级21=2，胶原纤维包绕虫卵肉芽肿四周；Ⅱ级22=4，汇管区有大量纤维，小叶间仅有少量纤维；Ⅲ级23=8，纤维组织大量延伸至肝小叶间.应用HPIAS1000高清楚度彩色病理图文分析系统，每组每次测量20～30个由单个成熟虫卵形

8、成的肉芽肿两个直角相交直径，以(最大横径+最大纵径)/2为平均值，并计算各组均值；测定VG染色切片胶原纤维灰度面积(S)和视野总面积(T)，用S/T比值表示胶原含量.1.2.2肝组织匀浆MDA含量和SOD活性测定硫代巴比妥酸比色法测定肝脏MDA含量，黄嘌呤氧化法测定SOD活性，按试剂盒说明书要求操作.1