第四部分 生物化学与分子生物学技术实践

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1、第四部分生物化学与分子生物学技术实践高频考点突破考点一血红蛋白的提取和分离1.蛋白质分离的依据蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度、吸附性质和对其他分子的亲和力等，可以用来提取和分离不同种类的蛋白质。2.方法及原理（1）凝胶色谱法原理蛋白质比较相对分子质量大相对分子质量小凝胶内部不能进入能进入运动方式垂直向下垂直向下和无规则扩散运动经过路程较短较长洗脱次序先流出后流出提醒凝胶色谱柱的直径大小不影响分离效果，但直径过大造成洗脱液体积大，样品稀释度大；凝胶色谱柱的高度与分离度有关。（2）凝胶电泳法原理凝胶电泳法的原理是不同蛋白质的带电性质

2、、电量、形状和大小不同，在电场中受到的作用力大小、方向、阻力不同，导致不同蛋白质在电场中的运动方向和运动速度不同。如下表：决定运动方向形成库仑力形成阻力决定运动速率电荷性质√电荷量√√分子形状√√分子大小√√3.实验操作流程红细胞洗涤——离心去除血清样品的处理释放血红蛋白——蒸馏水涨破分离血红蛋白——离心处理粗分离——透析（去除小分子杂质）纯化——凝胶色谱法进行分离和纯化纯度鉴定——SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定相对分子量提醒①红细胞洗涤过程中，洗涤三次后，上清液仍有黄色，可增加洗涤次数，否则无法除去血浆蛋白；离心时转速要低，时间要短，否则白细胞等会一同沉淀，达不到

3、分离效果。②血红蛋白释放过程中，蒸馏水的作用是涨破红细胞，甲苯的作用主要是溶解细胞膜。③为了加快干凝胶的膨胀，可将加入洗脱液的湿凝胶用沸水浴加热，逐渐升温至接近沸腾，通常只需1～2h。这种方法不但节约时间，而且可以除去凝胶中可能带有的微生物，排除胶粒内的空气。④滴加样品时，吸管管口要贴着管壁环绕移动，防止破坏凝胶面。对位训练1.为了提取血红蛋白，从学校附近的屠宰场索取新鲜的猪血，对猪血处理的正确操作是（）A.要在采血容器中预先加入抗凝血剂柠檬酸钠B.取血回来后，马上进行高速长时间离心C.将离心后的血细胞加入清水缓慢搅拌D.重复洗涤直到上清液呈红色为止A2.洗涤红细胞时

4、，离心所用方法为（）A.低速长时间离心B.低速短时间离心C.高速长时间离心D.高速短时间离心B考点二植物芳香油的提取1.植物芳香油的基本知识（1）成分：组成较复杂，主要包括萜类化合物及其衍生物。（2）特点：具有很强的挥发性，易溶于有机溶剂。（3）应用：玫瑰精油是制作高级香水的主要成分，能使人产生愉悦感；橘皮精油的主要成分是柠檬烯，具诱人的橘香味，是食品、化妆品和香水配料的优质原料。2.玫瑰精油的提取流程鲜玫瑰花+清水→水蒸气蒸馏→油水混合物分离油层除水玫瑰油3.玫瑰精油提取操作的关键（1）安装装置顺序：从左到右，自下而上。（2）温度计位置：温度计水银球的上限与蒸馏瓶侧

5、管的下限处在同一水平线上。（3）冷凝管中的水流向：从下方进水，上方出水，与蒸气流向相反。加入NaCl加入无水Na2SO4过滤（4）加热时防暴沸：垫石棉网，向液体中加入几粒沸石或瓷片。（5）烧瓶内液体量：烧瓶容积的1/3～2/3。（6）除水：加入无水Na2SO4后，放置时间可适当延长些。（7）温度及时间：为提高产品质量，要严格控制蒸馏温度，可适当延长蒸馏时间。4.橘皮精油的提取流程石灰水浸泡→漂洗→压榨→过滤→静置→再次过滤→橘皮油5.橘皮精油提取操作的关键（1）橘皮的处理：干燥后一定要用石灰水浸透，时间至少10h以上。（2）压榨液的处理：可以先用普通布袋过滤除去固体物

6、和残渣，然后离心进一步除去质量较小的残留固体物，再用分液漏斗或吸管将上层的橘皮油分离出来。对位训练3.植物芳香油易溶于（）A.水B.盐酸C.碳酸D.酒精D4.橘皮在压榨前，应用下列哪种液体浸泡（）A.石灰水B.水C.酒精D.盐酸A考点三蒸馏、压榨和萃取三种方法的比较提取方法水蒸气蒸馏压榨法有机溶剂萃取实验原理利用水蒸气将挥发性较强的芳香油携带出来通过机械加压，压榨出果皮中的芳香油使芳香油溶解在有机溶剂中，蒸发溶剂后就可获得芳香油方法步骤（1）水蒸气蒸馏（2）分离油层（3）除水过滤（1）石灰水浸泡、漂洗（2）压榨、过滤、静置（3）再次过滤（1）粉碎、干燥（2）萃取、过滤

7、（3）浓缩适用范围适用于提取玫瑰油、薄荷油等挥发性强的芳香油适用于柑橘、柠檬等易焦糊原料的提取适用范围广，要求原料的颗粒要尽可能细小，能充分浸泡在有机溶液中优点简单易行，便于分离生产成本低，易保持原料原有的结构和功能出油率高，易分离局限性水中蒸馏会导致原料焦糊和有效成分水解等问题分离较为困难，出油率相对较低使用的有机溶剂处理不当会影响芳香油的质量提醒①水蒸气蒸馏要适当延长蒸馏时间，温度不能太高。②用于萃取的有机溶剂必须事先精制，除去杂质。③压榨时原料必须要浸透，这样压榨时不会滑脱，出油率高，不堵塞筛眼；使用石灰水充分浸泡原料，破坏细胞结构，分解果胶，