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《石蜡包埋组织中4种DNA提取方法的比较研究_张旭垠.docx》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、中国妇幼健康研究2007年第18卷第4期291石蜡包埋组织中4种DNA提取方法的比较研究张旭垠,易晓芳,丁景新,丰有吉(复旦大学附属妇产科医院妇科,上海200011)[摘要]目的探讨石蜡包埋组织中提取DNA的简易有效方法。方法取我院2003年肿瘤细胞减灭术切除的10%甲醛固定石蜡包埋的上皮性卵巢癌标本20例,分别以一步法、氯化钠盐析法、酚氯仿抽提法、试剂盒法提取其DNA,然后进行电泳和聚合酶链反应扩增分析。结果酚氯仿抽提法所得样本DNA的产量为55.12±8.81μg,氯化钠盐析法为58.39±5.76μg,
2、两者比较无显著差异(P>0.05),但分别和另外两组相比有显著差异(P<0.001);酚氯仿抽提法所得样本DNA的OD260/OD280比值为1.81±0.16,氯化钠盐析法为1.84±0.18,两者比较无显著差异(P>0.05),但分别和另外两组相比有显著差异(P<0.01);酚氯仿抽提法,氯化钠盐析法所得DNA产量和质量均高于一步法和试剂盒法。结论蛋白酶K消化氯化钠盐析法简便快捷,不用接触有毒的化学药品,是理想的石蜡包埋组织DNA提纯方法。[关键词]DNA提取;聚合酶链反应;石蜡包埋组织;氯化钠盐析法[中
3、图分类号]R737.31;R73-3[文献标识码]A[文章编号]1673-5293(2007)04-0291-03ComparisonofdifferentmethodsforextractionofDNAfromparaffin-embeddedtissuesZHANGXu-yin,YIXiao-fang,DINGJing-xin,FENGYou-ji(DepartmentofGynecology,TheAffiliatedObstetricalandGynecologicalHospitalofFudan
4、University,Shanghai200011,China)[Abstract]ObjectiveToexploreanoptimalmethodforextractionofDNAfromparaffin-embeddedtissues.MethodsTwentyformalin-fixed,paraffin-embeddedepithelialovarycanceroustissuespecimenwereselectedanddividedintofourgroupsaccordingtotheme
5、thodforDNAextraction.Fourmethodsincludedone-stepmethod,salting-outprocedure,conventionalpheno-lchlorofomrextractionmethodandgenomicDNApurificationkit.ThequalityofobtainedDNAwasanalyzedbyelectrophoresisandPCRamplification.ResultsThepurityandyieldofDNAextract
6、edbysalting-outproceduremethodandconventionalpheno-lchloroformmethodwerebetterthanone-stepmethodandgenomicDNApurificationkit.ConclusionProteinaseKdigestionsalting-outmethodisanoptimalmethodforextractionofDNAfromparaffin-embeddedtissues.[Keywords]DNAextracti
7、on;PCR;paraffinembeddedtissue;NaClsalting-outmethod自1985年Goelz等首次成功地从甲醛固定石蜡包埋组织中提取出了DNA之后,国外许多学者对石蜡包埋组织提取DNA的方法进行了研究。但组织经甲醛、石蜡包埋后很容易引起DNA的交联和降解,使研究工作受限。如何从石蜡包埋组织中提取高质量的DNA是一个迫切需要解决的问题。本文的目的是为了探索自普通10%甲醛固定石蜡包埋组织中提取DNA的最佳方法。1材料与方法1.1组织标本随机选取我院2003年肿瘤细胞减灭术切除(术
8、前均未接受过放疗、化疗)的10%甲醛固定石蜡包埋的上皮性卵巢癌标本20例,仔细检查无霉菌和细菌污染后,常规切片苏木素-伊红(HE)染色,显微镜下观察确保组织结构清晰,无自溶、坏死和大片出血后,切取10μm厚切片,每10片放入一个1.5mL无菌离心管中。每例共切40片,共80管。1.2主要试剂与仪器氯化钠/三羟甲基氨基甲烷乙/二胺四乙酸二钠盐(STE)液(0.1mol/LNaCl、10mmol/LTr
