CAT酶活性测定说课讲解.doc

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1、…………………………………………………………最新精品资料推荐……………………………………………………植物组织中过氧化氢酶的活性测定—紫外吸收法【原理】H2O2在240nm波长下有强烈吸收，过氧化氢酶能分解过氧化氢，使反应溶液吸光度(A240)随反应时间而降低。根据测量吸光率的变化速度即可测出过氧化氢酶的活性。【仪器与用具】紫外分光光度计；冷冻离心机；研钵；容量瓶；刻度吸管；恒温水浴；分析天平【试剂】1.0.05mol/LpH7.0磷酸缓冲液2.0.2mol/LH2O2溶液：30%H2O211.36ml溶于磷酸缓冲液中，定量至250ml。3.0.05m

2、ol/LTris-Hcl缓冲液（pH7.0）【材料】正常生长或经逆境处理的新鲜植物组织【方法步骤】1.酶液提取：称取剪碎混匀的植物样品（如叶片等）1.00g置与预冷的研钵中，加入适量预冷的pH7.0磷酸缓冲液和少量石英砂冰浴研磨成匀浆后，转入10ml容量瓶中，并用缓冲液冲洗研钵数次，合并冲洗液，并定容到10ml。取提取液5ml于离心管中，在4℃、15000g下离心15min，上清液即为过氧化氢酶粗提液。4℃下保存备用。2.CAT活性测定（1）取10ml具塞试管，加2ml酶提取液于沸水浴中加热煮死，冷却备用。（2）取10ml具塞试管，3支为测定管（3个

3、重复），1支为对照，按下表加入试剂：表40-2紫外吸收法测定H2O2样品液配置表管号S1S2S3S4Tris-Hcl1.01.01.01.0粗酶液(ml)0.10.10.10.1(煮死酶液)蒸馏水(ml)1.7(4)1.7(4)1.7(4)1.7(4)将上述4支试管于25℃水浴中预热3min后,逐管加入0.2ml0.2mol/L的H2O2溶液，每加完一管立即在紫外分光光度计上测定A240（蒸馏水调零），每隔30s读数一次，共测3min,记录4支试管的测定值。（需用石英比色杯）3.结果计算：以1min内A240降低0.1（三支测定管的平均值）的酶量为1

4、个酶活单位（u），先求出3支测定管各自1min内A240降低值，按下式计算CAT活性。过氧化氢酶活性(u/gFW/min)=式中A240=AS0－(+As3)AASS123+—AS0—加入煮死酶液的对照管吸光值；AS1,AS2,As3—样品测定管吸光值；…………………………………………………………最新精品资料推荐……………………………………………………3…………………………………………………………最新精品资料推荐……………………………………………………Vt—酶提取液总体积（ml）；V1—测定时用酶液体积（ml）；FW—样品鲜重（g）；0.1—A240

5、每下降0.1为1个酶活单位（u）；t—加过氧化氢到最后一次读数时间（min）。【注意事项】凡在240nm下有强吸收的物质对本实验有干扰。【思考题】1.影响过氧化氢酶活性测定的因素有哪些?2.过氧化氢酶与哪些生化过程有关?XXX公司网络安全管理制度为加强公司网络系统的安全管理，防止因偶发性事件、网络病毒等造成系统故障，妨碍正常的工作秩序，特制定本管理办法。一、网络系统的安全运行，是公司网络安全的一个重要内容，公司专人负责网络系统的安全运行工作。二、网络系统的安全运行包括四个方面；1、是网络系统数据资源的安全保护；2、是网络硬件设备及机房的安全运行；3、

6、是网络病毒的防治管理；4、是上网信息的安全。（一）数据资源的安全保护网络系统中存贮的各种数据信息，是生产和管理所必须的重要数据，数据资源的破坏将严重影响生产与管理工作的正常运行。数据资源安全保护的主要手段是数据备份，规定如下：1、办公室要做到数据必须每周一备份。2、财务部要做到数据必须每日一备份。3、一般用机部门要做到数据必须每周一备份。4、数据备份时必须登记以备检查，数据备份必须正确、可靠。5、严格网络用户权限及用户名口令管理。6、纸质数据长期保留，电子数据半年更新，留存一年。（二）硬件设备及机房的安全运行1、硬件设备的供电电源必须保证电压及频率质

7、量，一般应同时配有不间断供电电源，避免因市电不稳定造成硬件设备损坏。…………………………………………………………最新精品资料推荐……………………………………………………3…………………………………………………………最新精品资料推荐……………………………………………………2、设备的检修或维护、操作必须严格按要求办理，杜绝因人为因素破坏硬件设备。3、网络机房必须有防盗及防火措施。4、保证网络运行环境的清洁，避免因集灰影响设备正常运行。（三）网络病毒的防治1、各服务器必须安装防病毒软件，上网电脑必须保证每台电脑要安装防病毒软件。2、定期对网络系统进行病毒检

8、查及清理。…………………………………………………………最新精品资料推荐…………………………………………………