胰蛋白酶活性测.doc

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1、胰蛋白酶活性测定原理：胰蛋白酶能催化蛋白质的水解，对于由碱性氨基酸（如精氨酸、赖氨酸）的羧基与其他氨基酸的氨基所形成的肽键具有高度的专一性。此外，胰蛋白酶也能催化由碱性氨基酸的羧基所形成的酰胺键和酯键，有高度的专一性仍表现为对碱性氨基酸羧基一侧的选择对此等化学键的催化水解活性的敏感度为：酯键＞酰胺键＞肽键。因此，可以利用含有这些化学键中任一种键型的底物来研究胰蛋白酶的专一催化活性。在动物胰脏中，胰蛋白酶是以无活性的酶原状态存在的。在生理条件下，胰蛋白酶原随胰液分泌至十二指肠后，在小肠上腔有Ca2+的环境中，为肠

2、激酶或胰蛋白酶所激活，其肽链N-端的赖氨酸与异亮氨酸之间的一个肽键被水解，失去一个酸性6肽，其分子构象发生一定的改变后转变为具有催化蛋白质水解活性的胰蛋白酶。胰蛋白酶原分子量约为24000，其等电点为pH8.9；胰蛋白酶的分子量约为23400，其等电点为pH10.8。胰蛋白酶在pH3.0时最稳定，其浓溶液可贮存于冰箱（0℃以下）数周而活性无显著丧失。pH＜3时，胰蛋白酶易变性。PH＞５时，胰蛋白酶易自溶。胰蛋白酶催化活性的最适pH为7.6～7.8。重金属离子、有机磷化合物和反应产物都能抑制胰蛋白酶的活性。胰脏、

3、卵清和大豆中也含有一些蛋白质对胰蛋白酶活性具有抑制作用。保存条件：①胰蛋白酶底物粉剂：4℃保存条件下3个月内有效②胰蛋白酶底物稀释液：4℃保存条件下3个月内有效③样本匀浆介质：4℃保存条件下6个月内有效