DNA的提取(34张)教学内容.ppt

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1、DNA的提取(34张)二、酒精是一种常用有机溶剂，但DNA却不能溶于酒精；三、蛋白酶能水解蛋白质，但是对DNA没有影响四、大多数蛋白质不能忍受60－80℃的高温，而DNA在80℃以上才会变性五、洗涤剂可以溶解细胞的细胞膜，去除脂质和蛋白质,但对DNA没有影响六、DNA的鉴定①DNA与二苯胺（沸水浴加热）会被染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。②甲基绿（绿色）实验设计2（一）实验材料的选取1、材料：鱼卵、猪肝、菜花、香蕉、鸡血、哺乳动物的红细胞、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、在液体培养基中培养的大肠杆菌。（从中选取2～3种实验材料）2、原则：凡是含有DNA的生物材料都可以考虑

2、，但选用DNA含量相对较高的生物组织，成功的可能性更大（二）破碎细胞，获取含DNA的滤液1、动物细胞的破碎：以鸡血为例，在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可。2、植物细胞的破碎：提取洋葱DNA时，在切碎的洋葱中加入一定的洗涤剂和食盐，进行充分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液。加入洗涤剂和食盐的作用分别是？如果研磨不充分，会对实验结果产生什么影响？洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于DNA释放；食盐有利于DNA溶解会使细胞核内DNA释放不完全，提取DNA量变少，影响实验结果，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等（三）去除滤液中的杂质方

3、案一：在滤液中加入NaCl，使NaCl溶液浓度为2mol/L，过滤除去不溶的杂质，再调节NaCl溶液浓度为0.14mol/L，析出DNA，过滤去除溶液中的杂质，再用2mol/L的NaCl溶解DNA。方案二：直接在滤液中加入嫩肉粉，反应10-15min，嫩肉粉中木瓜蛋白酶能够分解蛋白质。方案三：将滤液放在60-75℃的恒温水浴中保温10-15℃，注意严格控制温度范围。（四）DNA的析出与鉴定1、DNA的析出：将处理后的溶液过滤，加入与滤液体积相等的、冷却的酒精溶液（体积分数为95%），静置2～3min，溶液中会出现白色丝状物，这就是粗提取的DNA。用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，

4、并用滤纸吸去上面的水分。2、DNA的鉴定：取两支20mL的试管，各加入物质的量浓度为2mol/L的NaCl溶液5mL，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解。然后，向两支试管中各加入4mL的二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min，待试管冷却后，比较两支试管中溶液颜色的变化，看看溶解有DNA的溶液是否变蓝。操作提示32.加入酒精和用玻璃棒搅拌时，动作要轻缓，以免加剧DNA分子的断裂，导致DNA分子不能形成絮状沉淀。3.二苯胺试剂要现配现用，否则会影响鉴定的效果。1.以血液为实验材料，每100ml加入3g柠檬酸钠，作为抗凝剂。①加入柠檬酸钠溶液的目的是防止

5、血凝固②加速血细胞破裂③溶解DNA④使2mol/L的NaCl溶液稀释至0.14mol/L使得DNA最大限度地释出⑤使含DNA的黏稠物被留在纱布上⑥使含DNA的黏稠物尽可能多的溶解于溶液中⑦除去含DNA的滤液中的杂质⑧提取DNA⑨A出现蓝色B无变化鸡血细胞液中DNA的粗提取实验流程图2mol/L⑤过滤→取纱布上的滤物纱布过滤⑥再次溶解DNA2mol/LNaCl溶液取滤物滤液⑦加冷酒精使DNA析出（纯化）冷酒精⑧DNA的鉴定DNA的粗提取与鉴定实验原理DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同DNA与其他细胞成分在酒精中溶解度不同DNA和蛋白质对酶、高温和洗涤剂耐受性不同DNA与二苯胺呈

6、现蓝色反应DNA粗提取选择适宜材料破碎细胞DNA的溶解和析出DNA的纯化鉴定DNA与二苯胺混合，沸水浴，呈现蓝色反应1.在DNA的粗提取实验过程中，两次向烧杯中加入蒸馏水的作用是()。A.稀释血液、冲洗样品B.使血细胞破裂、降低NaCl浓度使DNA析出C.使血细胞破裂、增大DNA溶解量D.使血细胞破裂、提取含杂质较少的DNAB2.下列关于DNA粗提取与鉴定的说法正确的是（）A．氯化钠的浓度越低，对DNA的溶解度越大B．人血也可代替鸡血进行实验C．柠檬酸钠的主要作用是加速血细胞破裂D．DNA不能溶于酒精D3．在破碎鸡血细胞时，要先加入20ml的蒸馏水，其作用是（）A．DNA溶解于水B

7、．血细胞破裂，DNA释放C．稀释血液，防止凝固D．有利于搅拌B4．若选择的实验材料为植物细胞，破碎细胞时要加入一定量的洗涤剂和食盐，加入食盐的目的是（）A．利于DNA的溶解B．分离DNA和蛋白质C．溶解细胞膜D．溶解蛋白质A5．在DNA粗提取实验中，向在溶解DNA的NaCl溶液中，不断加入蒸馏水的目的是（）A．有利于溶解DNAB．有利于溶解杂质C．减少DNA的溶解度D．减少杂质的溶解度C退出此课件下载可自行编辑修改，仅供参考！感谢您的支持，我们努力做得更好！谢谢