基因工程的基本操作程序(2).ppt

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1、基因工程的基本操作程序自学提纲（自学教材P12—P15，完成问题）1、什么叫转化？2、将目的基因导入植物细胞的方法有哪些？常用的是哪种方法？如何使用？3、将目的基因导入动物细胞的方法是什么？过程？4、将目的基因导入微生物细胞的方法是什么？5、怎样完成目的基因分子水平的检测？6、怎样完成目的基因个体生物水平的鉴定？三、将目的基因导入受体细胞转化——方法将目的基因导入植物细胞将目的基因导入动物细胞将目的基因导入微生物细胞农杆菌转化法基因枪法花粉管通道法——显微注射法——感受态细胞目的基因进入_________内，并且在受体细

2、胞内维持_____和_____的过程受体细胞稳定表达1、将目的基因导入植物细胞的方法：农杆菌转化法（1）农杆菌介绍（2）原理及适用范围2、将目的基因导入动物细胞（1）方法：显微注射法（2）程序：3、将目的基因导入微生物细胞（1）思考：为什么选用微生物作为受体细胞？（2）方法：Ca2+四、目的基因的检测与鉴定——检查是否成功检测鉴定——①检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了目的基因②检测目的基因是否转录出了mRNA③检测目的基因是否翻译成蛋白质抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等方法——方法——方法——DNA分子杂交分子杂交

3、（注意与上不同之处）抗原—抗体杂交多细胞生物的检测，将每个受体细胞单独培养并诱导发育成完整个体，检测这些个体是否摄入目的基因，摄入的基因是否表达（是否表现出相应的性状）。淘汰无变化的个体，保留有相应变化的个体进一步培养、研究。例：用棉铃饲喂棉铃虫，如虫吃后不出现中毒症状，说明未摄入目的基因或摄入目的基因未表达。如虫吃后中毒死亡，则说明摄入了抗虫基因并得到表达。从个体水平鉴定DNA分子杂交示意图采用一定的技术手段，将两种生物的DNA分子的单链放在一起，如果这两个单链具有互补的碱基序列，那么，互补的碱基序列就会结合在一起，形

4、成杂合双链区；在没有互补碱基序列的部位，仍然是两条游离的单链。1）以下说法正确的是（）A、所有的限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列B、质粒是基因工程中唯一的运载体C、运载体必须具备的条件之一是：具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接D、基因控制的性状都能在后代表现出来C练习2）不属于质粒被选为基因运载体的理由是A、能复制（）B、有多个限制酶切点C、具有标记基因D、它是环状DNAD练习3）有关基因工程的叙述中，错误的是（）A、DNA连接酶将黏性末端的碱基对连接起来B、限制性内切酶用于目的基因的获得C、目的基因须由运载体导入

5、受体细胞D、人工合成目的基因不用限制性内切酶A练习4）有关基因工程的叙述正确的是（）A、限制酶只在获得目的基因时才用B、重组质粒的形成在细胞内完成C、质粒都可作为运载体D、蛋白质的结构可为合成目的基因提供资料D练习5）基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的。在基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的步骤是（）A、人工合成目的基因B、目的基因与运载体结合C、将目的基因导入受体细胞D、目的基因的检测和表达C练习为扩大可耕地面积，增加粮食产量，黄河三角洲等盐碱地的开发利用备受关注。我国科学家应用耐盐基因培育出了耐盐水稻新

6、品系。⑴获得耐盐基因后，构建重组DNA分子所用的限制性内切酶作用于图中的_____处，DNA连接酶作用于_______处。（填“a”或“b”）aa⑵将重组DNA分子导入水稻受体细胞的常用方法有农杆菌转化法和_______________________________法。（3）为了确定耐盐转基因水稻是否培育成功，既要用放射性同位素标记的_____________________做探针进行分子杂交检测，又要用_______________________方法从个体水平鉴定水稻植株的耐盐性。基因枪（花粉管通道）耐盐基因（目的

7、基因）一定浓度盐水浇灌（移栽到盐碱地中）