上课用3、1菊花的组织培养(经典)1.ppt

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1、资料分析一1958年，美国科学家斯图尔德取胡萝卜韧皮部的一些细胞，在无菌环境中，利用人工配置的富含各种植物所需营养成分及激素的培养基,在适宜的温度、pH、光照等环境条件下进行培养，由于细胞分化而最终发育成完整的新植株，斯图尔德成功的在生物学界引起了很大的震动。此后多年，科学家和技术人员利用该项技术，将许多离体的小块植物组织进行了培养，并获得了成功。菊花的组织培养一、植物组织培养的基本过程愈伤组织资料2.烟草和胡萝卜的组织培养较为容易，而枸杞愈伤组织的芽诱导比较难一般来说，容易进行无性繁殖的植物，也容易进行组织培养实例：秋海棠、芦荟、豆瓣绿、月季不同的植物组织，培养的难易程度差别很大二、

2、影响植物组织培养的因素1、外植体的选取资料3影响因素原因外植体年龄通常外植体年龄越小，分化程度越小，组培成功率越高外植体部位芽尖、根尖或幼嫩茎的组织细胞分裂能力强，含病毒少外植体的保存时间保存时间越短生命力越旺盛，组培成功率越高因此，植物材料的选择直接关系到实验的成败通常选未开花植株的茎上部新萌生的侧枝，其原因是该处组织生长旺盛，生理状况好，容易诱导脱分化和再分化思考：应该选取菊花的什么部位进行组织培养？为什么？MS培养基主要成分大量元素：N、P、S、K、Ca、Mg、微量元素：B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co有机物：甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等思考：你能说出各种营养物质

3、的作用吗？思考:同微生物培养基相比，MS培养基的配方有哪些明显的不同？微量元素和大量元素提供植物细胞生活所必需的无机盐；蔗糖提供碳源，同时能够维持细胞的渗透压；甘氨酸、维生素等物质主要是为了满足离体植物细胞在正常代谢途径受到一定影响后所产生的特殊营养需求。2.营养MS固体培养基成分及比例微生物培养基以有机营养为主。与微生物的培养不同，MS培养基则需提供大量无机营养，无机盐混合物包括植物生长必须的大量元素和微量元素两大类。思考：你认为组织培养过程中，关键的步骤是什么？怎样控制？用量比例结果生长素＞细胞分裂素促根分化，抑芽形成生长素＜细胞分裂素促芽分化，抑根形成比值适中促进愈伤组织生长当同

4、时使用这两类激素时，两者的用量比例影响着细胞的发育方向3、调节剂思考：以下培养基出现的现象反应了什么问题？生长素＞细胞分裂素生长素＜细胞分裂素不同植物激素使用顺序使用顺序实验结果先生长素，后细胞分裂素有利于细胞分裂但不分化先细胞分裂素，后生长素细胞既分裂也分化同时使用分化频率提高资料分析4诱导菊花愈伤组织：在MS培养基中加入BA和IAA，质量浓度均为0.5mg/ml诱导菊花丛芽:在MS培养基中加入BA和IAA，质量浓度分别为2~3mg/ml和0.02~0.3mg/ml诱导菊花生根：MS培养基各成分用量减半，并添加NAA或IAA，质量浓度均为0.1mg/ml结论：1.植物激素的浓度、使用

5、的先后顺序以及用量比等，都会影响实验结果。2.植物激素中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素。4、环境因素（菊花组培）pH=5.8温度控制在18—22℃每日光照12h◆随讲随练1◆某班级四个实验小组根据本科所学内容进行菊花组织培养实验，具体实验操作如下，请将操作过程中的不合理之处找出，并加以改正第1小组选取刚刚开过花的菊花植株的茎的中部作为实验材料。第2小组培养基中的主要成分及配方为：碳源——牛肉膏；氮源——蛋白胨；无机盐——包含N、P、K、Fe、Zn、Ca等的大量元素和包含Mn、Mo、Mg、S、I、Co、B、Cu、等的微量元素；特殊有机物——各种氨基酸、维生素

6、、烟酸、肌醇等。培养几天后，第3小组发现其培养基中出现瘤状海绵组织，为促进其生长，换至含有细胞分裂素的培养基中，并且每天用日光灯照射培养物24h。第4小组认为再分化过程一般先生根后生丛芽才有利于试管苗的生长，所以先用生长素＞细胞分裂素的培养基培养愈伤组织。第5小组培养的植物组织最终形成一团细胞，始终未出现再分化现象，小组成员认为是培养基中生长素过少所致。1一个细胞或一块组织为什么能培养成完整植株？理论基础是什么？2为什么细胞具有全能性？3生物体内的细胞能表现出全能性吗？4什么是细胞分化？实质是什么？有什么特点？5.什么是愈伤组织？愈伤组织的细胞有什么特点？6.什么是脱分化、再分化？制备

7、MS固体培养基外植体消毒接种培养栽培二、实验操作移栽冲洗—酒精—无菌水冲洗—氯化汞—无菌水冲洗至少三次之上配制各种母液配制培养基灭菌无机物怎么配置；激素类、维生素类、用量小的有机物1配制培养基的步骤1）、配制MS培养基2）、加琼脂3）、加蔗糖4）、加大量元素、微量元素、有机物、植物激素5）、灭菌2、外植体消毒：1）用到什么溶液？有什么作用？2）为什么用酒精时要控制好时间3）为什么用流水、无菌水进反复的清洗？3、接种1）将消过毒的菊花茎段在哪切成