肾活检光镜制片、切片、染色技术规范

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1、肾活检光镜制片、切片、染色技术规范一、取材快速取材，取皮质（小红点，相对较粗）或皮质-髓质组织，一般大于10个肾小球。二、制片1.固定：A.Bouin液固定4小时。B.福尔马林液固定1-2小时。2.随常规组织脱水，透明，浸蜡，包埋。3.切片①恒温恒湿：温度20℃-22℃，相对湿度60°（温度计和湿度计控制）。②连续切片，厚1微米。③贴片：每张玻片保持2-3条组织。④烤片温度60度，30分钟左右，PASM再90度烤40分钟以上。注意事项：1.取材要快，避免挤压。2.定期更换试剂。3.包埋平整。三、染色（一）HE

2、染色1.切片常规脱蜡至水。2.苏木素染细胞核10分钟，水洗。3.1%盐酸分化1秒，水洗，蓝化液促蓝。4.0.5%伊红染细胞浆5分钟。5.逐级酒精脱水，TO透明，中性树胶封片。（苏木素2.5克+纯酒精10毫升+硫酸铝钾25克+蒸馏水330毫升+碘酸钠0.25克+甘油150毫升+冰醋酸5毫升）（二）PAS染色1.切片常规脱蜡至水。2.1%高碘酸氧化15分钟，水洗。3.Schiff氏液37℃10分钟（镜下控制），水洗。4.1%偏重亚硫酸钠分化1分钟，水洗。5.苏木素染核，盐酸分化，水洗。6.脱水，透明，封片。（碱性

3、品红1克+1N盐酸20毫升+偏重亚硫酸钠2克+蒸馏水200毫升+活性炭2克）（三）PASM-Masson染色1.切片常规脱蜡至水。2.Bouin液微波2分钟，水洗。3.1%高碘酸氧化20分钟，水洗，蒸馏水洗。1.1%偏重亚硫酸钠1分钟，水洗，蒸馏水洗。2.六胺银液10-20分钟（根据病变镜下观察确定时间）。3.2%硫代硫酸钠2分钟，水洗（必要时氯化金分化2秒），吹干。4.Masson复染。5.快速脱水，透明，封片。（预温六胺银储备液20毫升+蒸馏水10毫升+5%四硼酸钠5毫升）（四）Masson-Trichr

4、ome染色1.切片常规脱蜡至水。2.Bouin液微波2分钟，水洗。3.苏木素染核，盐酸分化，水洗，吹干。4.丽春红酸性品红染2-3分钟（镜下控制），蒸馏水洗。5.1%磷钼酸分化1分钟，直接甩干。6.1%亮绿2-3分钟（镜下控制）。7.1%冰醋酸30秒。8.快速脱水，透明，封片。（丽春红0.7克+酸性品红0.3克+冰醋酸1毫升+蒸馏水99毫升）注意事项：1.常规脱蜡要彻底。2.Schiff氏液要4度保存，用前需复温。3.PASM-Masson染色标本缸要干净、不挂水，切片要求烤40分钟90度，显微镜下控制染色深

5、浅。4.PASM-Masson染色复染前吹干，防脱片。