影响肾穿刺活检六胺银染色的因素

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1、万方数据第27卷第3期(第87页)湖北民族学院学报·医学版2010年JournalofHubeiUniversityforNationalities·MedicalEditionV01．27No．3P．8720lO影响肾穿刺活检六胺银染色的因素黎家华三峡大学医学院(湖北宜昌443002)【关键词】肾穿刺活检；六胺银染色法；影响因素【中图分类号】R378．21【文献标识码】A【文章编号】1008—8154(2010)03一0087—02肾穿刺活检已普遍应用于肾小球肾炎的分类和诊断，所采取的小块活检，一般采用六胺银染色法，以便清楚地显示肾小球基底膜的改变。基底膜是由Ⅳ型

2、胶原蛋白、蛋白多糖和层粘连蛋白等组成，经过氧化剂处理后，能使肾小球基底膜上的糖类及有关物质中的1，2—2二醇转变为醛，暴露更多的醛基，醛与银离子发生银镜反应，能较好的显示肾小球毛细血管基底膜的情况。在日常作肾组织六胺银染色的过程中，常会受较多不确定因素的影响，如果处理不当，将直接影响到染色效果，造成病理诊断困难‘1,21。笔者就影响肾穿刺活检六胺银染色的因素作一简述。1组织固定不良对染色的影响肾穿刺取得的活检标本，固定不及时，组织产生自溶；或取材后没有及时处理，放置过久组织干涸；固定时间短，固定不良等，都会导致结构破坏，染色质量欠佳，不能进行正确的诊断。因此，组织固

3、定的好坏是制片的关键。新取出的活检标本放在纱布上用生理盐水将血冲洗干净，立即放进固定液内进行固定。2包埋、切片对染色的影响由于肾穿刺获得的肾组织比较细小，固定、包埋时若没有放平整，易出现弯曲，不能切取最大切面，导致肾小球数目减少或没有；切片过厚会使六胺银染色过深，导致细胞增生、基底膜增厚的假象，不利于观察诊断，并且在高温染色过程中容易脱片，因此；为保证切片完整及切取最大切面，肾穿刺的组织在固定、包埋时，应保证其平整性。为切取最大切面完整的切片提供保障。要求切片厚度应≤3岬，且无皱折及刀痕为宜，才能有效的控制六胺银染色的深浅，比较清晰地显示基底膜的形态结构。为防止在染

4、色过程脱片，载玻片应进行放脱片处理，我们采用的方法是：载玻片经洗衣粉擦洗，清水冲洗干净，泡清洁液24h，清水冲洗，蒸馏水洗净．烘干，涂APES(防脱片剂，用丙酮l：50稀释，将洗净载玻片放入其中30s拿出，蒸馏水洗)晾干备用，捞片时一步到位，在60℃温箱考2-4h，使切片组织充分的粘附在载玻片上。效果爽佳，没有再出现脱片现象。3脱蜡不够彻底对染色的影响脱蜡时间太短；脱蜡剂(二甲苯)使用时间较长，溶蜡达到饱和时，则脱蜡能力下降或丧失；在冬天室温低，脱蜡剂的脱蜡效果差，脱蜡不彻底，组织上有残余的石蜡，用0．5％高碘酸氧化处理时，不能对肾小球毛细血管基膜进行有效的氧化，直

5、接妨碍六胺银染色。此时：应及时更换新的脱蜡剂。若因室温低而脱蜡效果不满意时，我们采取的措施是：置于37℃温箱内脱蜡、延长脱蜡时间和增加一次脱蜡(30minx3次)，能达到较好的脱蜡效果。4氧化剂浓度及处理时间对染色的影响高碘酸处理切片时的浓度和时间的不同，导致着色深浅不一。浓度偏低、处理时间短，对肾小球毛细血管基膜氧化作用不足，着色比较浅或根本不着色，往往需要延长六胺银染色时间，浓度高、处理时间长，则易导致氧化过度，着色很深，造成基膜增厚变粗的假象，不能正确显示其病理改变，还易形成黑色反光膜，给观察诊断造成困难。氧化剂经长期反复使用，其氧化功能也会逐渐减弱，则需要更

6、换新的氧化剂。因此：保持氧化剂足够的浓度和处理时间，是做好基底膜染色的前提。通过做预实验：设计不同的浓度和不同的处理时间，反复做几次，再根据染色结果确定适合本实验室的染色方案。有文献报万方数据88湖北民族学院学报·医学版第3期道‘1’21：采用双重氧化，即先用l％高碘酸10rain，再用5％铬酸20一40rain，能充分暴露更多的醛基，加强基底膜着色。5六胺银染色的时间和温度对染色的影响六胺银染色的时间的长短受染液的新鲜度、温度高低等因素的影响，染色时间过短，染色反应不足，基底膜着色浅，肾小球基底膜不能清晰显示出来；染色时间过长，染色反应过度，基底膜着色很深，组织切

7、片表面还会出现的银镜反应所形成的黑色反光膜，切片背景显得很脏，影响对比染色。温度的高低，决定染色结果的是否成功，温度低于60℃，组织的反应缓慢，浸染时间长，易出现的黑色沉淀，氯化金调色时无法清除，温度更低，则几乎不反应，温度过高(高于70℃)溶液易加速氧化反应而变混浊，组织的反应快，易过染，难以控制，不利于观察病变。选择合适染色的温度是六胺银染色成功的关键，有专家采用微波快速预热的方法、温度控制在60℃一65℃之间【2．3】。在气温较低时，六胺银溶液先用微波预预热，使六胺银溶液温度快速达到65℃，将切片放进溶液内开始染色，可以缩短在高温中的染色时间，减少黑色沉淀