DB13_T2598-2017花生品种真实性与纯度鉴定SSR法.pdf

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1、ICS67.060B22DB13河北省地方标准DB13/T2598—2017花生品种真实性与纯度鉴定SSR法2017-11-22发布2017-12-22实施河北省质量技术监督局发布DB13/T2598—2017前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由河北农业大学提出。本标准起草单位：河北农业大学。本标准主要起草人：杨鑫雷、刘立峰、崔顺立、郭丽果、陈焕英、穆国俊、李洪珍。IDB13/T2598—2017花生品种真实性与纯度鉴定SSR法1范围本标准规定了利用SSR标记对花生品种真实性与纯度进行鉴定的术语和定义、原理、试剂材料、操作程序、数据分析和

2、判定规则。本标准适用于利用SSR法对花生品种真实性与纯度鉴定的试验过程。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T3543.2-1995农作物种子检验规程扦样GB/T3543.4-1995农作物种子检验规程发芽试验GB/T6682-2008分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1品种真实性（VarietalGenuineness）供检品种与文件记录(如标签等)是否相符。3.2品种纯度（Varie

3、talPurity）品种在特征特性方面典型一致的程度，用供检样品中本品种的种子数占样品种子总数的百分率表示。3.3简单重复序列SSR（SimpleSequenceRepeat）基因组中以几个核苷酸（一般为2个～6个）为重复单元的长达几十至几百个核苷酸的串联重复序列，又称微卫星标记。注：由于基本单元重复次数的不同，形成了SSR长度的多态性。3.4聚合酶链式反应PCR（PolymeraseChainReaction）一种用于在体外扩增DNA序列的技术程序。注：模板DNA经高温变性为单链，在DNA聚合酶和适宜温度下，两条引物分别与DNA模板两条链上的一段互补序列发生退火

4、，并在DNA聚合酶的催化下以四种dNTP(deoxy-ribonucleosidetriphosphate，脱氧核苷三磷酸）为底物，使退火引物延伸从而合成DNA。如此变性退火和合成DNA反复循环，使位于两段已知序列之间的DNA片段呈几何倍数扩增。1DB13/T2598—20173.5引物Primer结合在模板DNA上的互补短链，提供3＇-OH末端作为DNA合成的起点，延伸合成模板DNA的互补链。3.6核心引物CorePrimerSSR标记分析优先选用多态性高、稳定性好，识别能力强的一套引物的引物。3.7标准样品StandardSample代表已知品种特征特性的育种

5、家种子作为标准样品。4原理花生基因组中存在着大量简单重复序列（SSR），由于SSR单元在不同基因型间重复次数不同，因此同一位点的SSR在不同品种间往往具有丰富的长度多态性。利用PCR技术扩增每个位点的简单重复序列，通过电泳分析其长度多态性，达到区别不同花生品种的目的。5试剂或材料警示：丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺具神经毒性，配制时应注意防护。除非另有说明，使用分析纯试剂和重蒸馏水应符合GB/T6682规定的一级水。5.1三羟甲基氨基甲烷（Tris）：分子式为C4H11NO3,CAS77-86-1。5.2氯化锂(LiCl)：CAS7447-41-8。5.3乙二胺四乙酸二

6、钠盐（EDTA·Na2）：分子式为C10H16N2O8Na2·2H2O，CAS60-00-4。5.4十二烷基硫酸钠(SDS)：分子式为C12H25NaO4S，CAS151-21-3。5.5聚乙烯吡咯烷酮（PVP）：分子式为(C6H9NO)41，CAS9003-39-8。5.6β-巯基乙醇：分子式为C2H6OS，CAS60-24-2。5.7酸酚（acidphenolpH4.3）。5.8异戊醇：分子式为C5H12O，CAS123-51-3。5.9Tris饱和酚（pH8.0）。5.10三氯甲烷：分子式为CHCl3，CAS67-66-3。5.11无水乙醇：分子式为C2H6

7、O，CAS64-17-5。5.12硫氰酸胍：分子式为CH5N3·CHNS，CAS593-84-0。5.13二水柠檬酸钠：分子式为C6H9Na3O9，CAS6132-04-3。2DB13/T2598—20175.14乙酸铵：分子式为C2H7NO2，CAS631-61-8。5.15十二烷基肌氨酸钠：分子式为C15H28NO3·Na，CAS137-16-6。5.16异丙醇：分子式为C3H8O，CAS67-63-0。5.17氯化钠：分子式为NaCl，CAS7647-14-5。5.18氢氧化钠：分子式为NaOH，CAS1310-73-2。5.19TaqDNA聚合酶：保存条件

8、为-20℃