微生物碳氮磷测定.docx

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1、土壤微生物量碳氮磷测定方法一、试剂配制 微生物量碳试剂：1硫酸钾溶液[c(K2SO4)=·L-1]：称取硫酸钾（K2SO4，化学纯），先溶于300ml去离子水中，加热，转移溶液至容器中，再加少量去离子水溶解余下的部分，转移溶液至同一容器中，如此反复多次。最后定容至1L；（需大量配制）2生物量C氧化剂：在130℃下烘干两个小时的K2Cr2O7与400mlH2O，2L的优级纯浓硫酸混合，配成的混合氧化剂溶液，在室温，棕色瓶中保存；3葡萄糖标准储备液（100mg/L）：准确称取的无水葡萄糖溶于1000mL的容量瓶中，存放在4℃冰箱，使用时稀释为所需标准溶液；微生物量氮试剂：4醋酸锂溶液：称取氢氧

2、化锂(LiOH·H2O)168g，加入冰乙酸(优级纯)279mL，，加水稀释到1000mL，用浓盐酸或50％的氢氧化钠溶液调节pH至；5茚三酮试剂：23g分析纯水合茚三酮溶解于750ml二甲基亚砜，加入250ml醋酸锂缓冲液，混合30min，使氧气和氮气排出；（注意此试剂在使用前一天配置，室温下密封保存）6氢氧化钠溶液（10mol/L）：400g分析纯氢氧化钠溶于去离子水，稀释至1L；7柠檬酸缓冲液：分析纯柠檬酸和氢氧化钠，溶于900ml去离子水，用10mol/L氢氧化钠调节Ph至，再用水稀释至1L；8乙醇溶液：95%分析纯乙醇与去离子水按体积比1：1比例混合；91mg/ml的硫酸铵标准储

3、存液：称取分析纯硫酸铵(称前105℃烘2h)溶于L硫酸钾溶液中，并用硫酸钾溶液定容至1000mL，摇匀，于4℃冰箱中保存。10ml的硫酸铵[(NH4)2SO4]标准液：吸取10mL1mol/L的硫酸铵标准储存液于100mL容量瓶中，用L硫酸钾溶液定容至100mL．摇匀。此溶液最好现配现用。11工作曲线的制备：分别吸取、0.50mL、、、、、ml的硫酸铵标准液于1000mL容量瓶中,用／L硫酸钾溶液定容至100mL，摇匀。然后取，按照样液的步骤进行显色和比色。微生物量磷试剂：121molL-1HCl溶液：用mL的浓盐酸用蒸馏水定容至100mL。13碳酸氢钠浸提液[c（NaHCO3）=L-1，

4、pH]：分析纯碳酸氢钠溶于800ml蒸馏水，用1molL-1NaOH溶液缓慢调节pH至，再用蒸馏水定容至1L。注意该浸提液放置时期过长时，因CO2释放使溶液pH升高。14硫酸溶液[c（H2SO4）=L-1]：分析纯浓硫酸（H2SO4，ρ=ml-1），用蒸馏水稀释定容至500ml。14钼酸铵溶液（4%）：分析纯钼酸铵溶于蒸馏水，定容至500ml。16抗坏血酸溶液[c（C6H8O6）=L-1]：抗坏血酸溶于75ml蒸馏水。抗坏血酸溶液极易被氧化，应在使用时当天配制。如需保存可于75ml此溶液中加入25mg乙烯二胺四烷基醋酸二钠和蚁酸使其稳定。17酒石酸锑钾溶液[ρ（Sb）=1mgml-1]：分

5、析纯酒石酸锑钾溶于蒸馏水，定容至100ml。18混合显色液：取上述125ml硫酸溶液与钼酸铵溶液混合，再加入75ml抗坏血酸溶液和酒石酸锑钾溶液，混匀。此溶液保存时间不宜超过24h。19标准磷酸二氢钾溶液[ρ（KH2PO4）=4μgPml-1]：分析纯磷酸二氢钾（称量前先经105℃烘2～3h），溶于少量蒸馏水，再加入少量硫酸，用蒸馏水定容至1L，即为40μgPml-1磷贮存液，置4℃下保存。取50ml贮存液稀释至500ml，即得到浓度为4μgPml-1磷溶液，此溶液不宜久存。二、样液制作1土壤灭菌（1）土壤混合均匀后过2mm筛，除去根、秸秆、石头等杂质，烘干法测定土壤样品含水量，以及土壤田

6、间饱和持水量（一般是土壤质量的30%）；（2）调节土壤含水量到田间饱和持水量的80%（水稻土适当冷冻干燥）左右。一般调节土壤含水量到25%；（3）每个样品称取相当于10克干土的土壤样品于100毫升塑料瓶中。（或称10克样品后根据含水量换算）；（4）塑料瓶盖上盖（注意盖上要钻孔以防止微波炉加热样品时爆炸），放入微波炉加热；（5）加热量：每1克土800焦耳热量。即为：每1克土应在功率为800W的微波炉加热1秒。每个样品10克土，则为10秒。若有10个样品（100克土），加热100秒。依次类推，注意样品不能太多。微波炉1层较适宜；（6）在加热时间到一半时，从微波炉中拿出样品来均匀搅拌后再继续加热

7、，杀灭效果更好。2浸提微生物量碳氮：将灭菌和未灭菌的两批土样每瓶加入40mlK2SO4溶液（土水比为1:4），盖紧瓶塞，振荡30分钟（25℃），用慢速定量滤纸过滤到150ml大三角瓶中，应立即测定。如不立即测定，用保鲜膜封口（防止污染和挥发），保存在-20℃的冰箱。同时做不加土壤的空白对照。微生物量磷：将灭菌与不灭菌土壤完全无损地转入250ml塑料浸提瓶中，加入200mlL-1NaHCO3浸提液（土水比为1:20，w:v