荧光共振能量转移FERT教学文稿.ppt

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1、荧光共振能量转移FERTFRET原理(Principle)FRET的条件发生FRET需要三个条件：DEmAEx1、供体分子的发射光谱和受体分子的吸收光谱必须有显著的重迭，一般大于30％；2、供体分子和受体分子间的距离必须在1–10nm之间.D和A间的FRET效率：6R0450500550600l(nm)E66RR0R0:E=50%时供体和受体分子间的距离.对于特定的供体受体对是常数;举例:R:供体和受体分子间的距离.E:FRET效率.对于R特别灵敏.假设R0=5nm,3、供体分子的发射态偶极

2、矩与受体分1）R=10nm,E=1.5%子的吸收态偶极矩、以及它们的向量必须满足一定的条件2）R=5nm,E=50%3）R=6nm,E=25%FRET的应用通过FRET技术可以获得有关两个蛋白分子之间相互作用的空间信息。常用于解决如下问题:1)蛋白分子的共定位;2)蛋白分子聚合体;3)转录机制;4)转换途径;5)分子运动;6)蛋白折叠等生物学问题.FRET技术应用一:检测两个发光分子间的重合与共定位LaserLaserDA荧光标记利用FRET技术检测不发光分子间相互作用的策略FRET技术应用二:

3、检测分子间的相互作用LaserFRET技术应用三:检测分子的折叠与构象变化LaserFRET技术应用举例：细胞内钙离子浓度的实时测量(b)MiyawakiA,etal.,Nature1997,388:882-887在FRET实验中经常使用的供体-受体荧光分子对1.染料类(Dye)FITC-RhodamineAlexa488-Cy3Cy3-Cy52.绿色荧光蛋白类(GreenFluorescentProteins,GFPs)BFP-GFPBFP-YFPCFP-YFPCFP-dsREDGFP-dsR

4、ED参考阅读文献•JonathanD.Violin,etal.,AgeneticallyencodedfluorescentreporterrevealsoscillatoryphosphorylationbyproteinkinaseC.JCellBiology,2003,161:899–909•ElizabethAJetl.,FRETImaging.NatureBiotechnology,2003,21:13887-1395•RajeshBS.Fluorescenceresonanceene

5、rgytransfer(FRET)microscopyimagingoflivecellproteinlocalizations.JCellBiology,2003,160:629–633•JinZhang,etal.,.GeneticallyencodedreportersofproteinkinaseAactivityrevealimpactofsubstratetethering.PNAS,2001,98:14997–15002•MichaelG.Erickson,etal.,DsReda

6、saPotentialFRETPartnerwithCFPandGFP.BiophysicalJournal,2003,85:599–611•AlexanderSorkin,etal.,InteractionofEGFreceptorandGrb2inlivingcellsvisualizedbyfluorescenceresonanceenergytransfer(FRET)microscopy.CurrentBiology2000,10:1395–1398思考题1.为什么FRET效率对供体受

7、体分子间的空间距离非常灵敏?2.你认为FRET技术特别适合什么领域?举例说明。3.A和B分子都不能发射荧光,要求采用FRET技术检测二者之间的相互作用特征,请问应该如何处理?论文题目：供体受体对之间R0定量分析与计算此课件下载可自行编辑修改，仅供参考！感谢您的支持，我们努力做得更好！谢谢