植物组培实验报告.doc

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1、.植物组织培养实验报告实验名称：葡萄柚的扩繁组织培养学院：园林学院专业：2012级园林小组成员：指导老师：实验日期：2014.9.1—2014.10.14.页脚.实验一：葡萄柚扩繁培养基的制备（1L)实验时间：9月1日实验地点:西南林业大学六楼实验室实验步骤：1．量取液体。大量元素100ml（用100ml的量筒量），微量元素、有机元素、铁盐均10ml（用10ml的量筒量），将上述量取的溶液混合于1L大烧杯中。2.加纯水至500-600ml刻度线稀释。3.称取蔗糖30g，用玻璃棒搅拌至溶解。4.定

2、容。用1000ml量杯定容后转移至大烧杯5.用移液枪取6-BA100μml,IBA40μml。6.混匀，调PH至5.9。7.称取琼脂7g于塑料盆。将调好PH的培养基倒入塑料盆，置于微波炉煮14min。8．分装，封口，标记。9.121℃高温灭菌20min。1000ml约一共分装33个瓶，加上实验老师给予的3个培养基我们组一共有36个瓶。.页脚.实验二：葡萄柚组培接种工作实验时间：9月3日实验地点：西南林业大学A栋六楼接种实验室实验过程：准备材料及器材：葡萄柚脱毒苗、超净工作台，手套、剪刀（3把）、

3、镊子（3把）、酒精灯两盏、无菌皿。实验步骤：1.接种前准备工作：用酒精棉球将超净工作台台面擦拭一遍，然后将所需物品放入超净工作台。2.接种操作：⑴将超净台的门打开至1/3，带上手套，用酒精将双手进行消毒，反复揉搓双手使手上酒精挥发完全，将手伸入超净台。⑵点燃酒精灯。点燃前要确保手上的酒精已完全挥发，否则容易造成危险打开无菌皿。⑶镊子消毒。先用手将报纸打开，后在酒精灯上灼烧（除手捏的地方不烧，其余的均要烧，烧到烫为止。镊子用完都要放到特定放镊子的架子中，且每次用时均要灼烧消毒）。⑷挑拣材料。先将盛

4、放葡萄柚脱毒苗的瓶子上的塑料膜取下。拿取镊子和剪刀（注意取放剪刀与镊子时要绕过培养基的瓶口，防止污染）。用镊子将所需脱毒苗从玻璃瓶中夹到无菌皿上。用剪刀及镊子小心的将脱毒苗的分支分开，将较高大的苗剪短。放在培养皿上备用。⑸.页脚.接种：先将培养瓶的瓶口打开（拎着密封膜两角将密封膜揭起，将其朝向外面的一面向下置于工作台上）。将培养瓶斜拿，在酒精灯前稍灼烧瓶口，后用镊子夹住葡萄柚插入培养瓶中（注意芽朝上，以免插倒），后将盖子密封膜盖上并用皮筋扎紧密封。整个接种过程要尽量在离酒精灯十厘米的地方进行，防

5、止污染。⑹清理台面。把用过的废弃物及不用的东西拿出超净台，将台面用酒精擦净。关上超净台的门。3.做记录：在培养瓶上标上葡萄柚首字母大写，日期及编号，以便日后观察记录。备注：因小组成员有六名，所以是两个人同时进行的接种操作。每人接种5~7瓶，上一人接种完成后，将剪刀、镊子用酒精灯灼烧消毒，放置于专用架子上。下一人进行操作时，用的是之前已灼烧消毒并已冷却的剪刀与镊子，而不是上一人刚消好毒还有些灼热的剪刀与镊子。接种实验过程图片如下：.页脚.9月3日，小组成员在认真的进行接种.页脚.观察记录：本小组一

6、共有6人，编序号后进行培养基的接种，后续观察结果如下。编号1组2组3组4组5组6组总瓶数75757536污染瓶数2201038未污染数53747228污染率28.6%40%020%060%22.2%（注：组别不代表实验操作顺序）由表中数据可以看出，个别成员组的污染率达到60%，较为严重。整体的污染率为22.2%。经回顾总结，本组导致污染的原因可能有以下几种（因外植体是由实验室提供，故暂不考虑外植体自带的污染）：1.培养基污染:因无白色云雾状物且出现在培养基部，所以说明并不是培养基在灭菌过程中时间

7、不够或气压不够所致的灭菌不彻底导致的污染，而有可能是由于扎口不紧或放置培养基的地方空气环境不洁净所致.2..页脚.操作过程中的污染：包括实验器皿消毒不彻底、接种人员对自身消毒不严或未熟练掌握无菌操作的各个技术环节，造成组培苗污染。实验器皿污染主要是部分操作时镊子与剪刀放置不当，或用酒精灯灼烧灭菌时灼烧时间过短造成。1.因本组是两人同时操作，故增加了空气流动性，也可能会造成污染。现将不同时间节点的葡萄柚组培苗图片归纳如下：9月11日，组培苗无明显变化，部分形成愈伤组织。.页脚.9月16日，可清晰地

8、看到愈伤组织，部分已分化出芽。同时有一瓶已被污染。.页脚.9月23日，组培苗继续生长，愈伤组织持续增大，分化出新的小芽。少数出现停止生长，叶片变得微黄。.页脚.10月8日，发现六瓶葡萄柚被污染。有些虽被污染，但里面的幼苗长势仍很好。而少数的有生长缓慢、叶片下垂，没有生气的现象。停止生长的原因可能是由于培养基的养分不均匀，导致生长不均衡。经过讨论，现在此将我们接种的葡萄柚组培苗未生长原因归纳如下：（1）在接种过程中，用镊子接种叶片时，镊子在灼烧灭菌后，冷却时间不足，导致植物细胞大面积烫伤或烫死。（