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1、马铃薯的块茎组织培养的研究生命科学学院生物工程132班组长：林伟平组员：温楚婷凌琦雯刘钰荧一,实验目的(1)以马铃薯的块茎为材料，研究经过器官分化或愈伤组织增殖与再分化途径，获得较多的试管苗，掌握植物快速繁殖的基本方法和过程。(2)观察和分析不同糖类对外植体愈伤组织诱导，增殖和器官分化的影响。二,实验原理在植物组织培养体系中，从外植体形成再生植株有不同的再分化途径，会受到培养基中不同浓度的糖的影响。植物的快速无性繁殖是指以合适的外植体为起始材料，在无菌条件下，通过合适的培养技术，在有限的空间，短时
2、间内快速生产大量植株的技术。三,实验材料，试剂与器具(1)实验材料：马铃薯块茎(2)试剂：实验十一配制的各种培养基母液，蔗糖，葡萄糖，琼脂，蒸馏水，1mol/LHCl,1mol/LNaOH,HgCl或次氯酸钠，吐温20，75%乙醇或20g/L新洁尔灭，无菌水等。(3)器具：高压灭菌锅，分析天平，酸度计，光照培养箱，微波炉，冰箱，培养架，果酱瓶，烧杯（1000mL,500mL,100mL,50mL）,移液管，量筒，不锈钢镊子，剪刀，解剖刀，脱脂棉，培养皿，称量纸，记号笔，标签纸，药匙，玻璃棒，洗耳球
3、，洗瓶，电炉，酒精灯四,实验内容1,确定培养基配方，MS+2，4-D1.0mg/L+6-BA1.0mg/L+8g/L琼脂+不同浓度的葡萄糖/不同浓度的蔗糖（分别为1%，2%，3%，4%的葡萄糖或蔗糖）2,培养基配制母液名称母液扩大倍数1000ml培养基配方吸取量（ml）大量元素2050微量元素10010铁盐10010有机附加物成分5020PGR浓度1000ml培养基配方吸取量（ml）2，4-D0.1106-BA0.1103,移液与溶化：将所需的各储存母液按顺序摆放好，将洁净的量筒，烧杯，移液管，玻
4、璃棒，漏斗等放在指定的位置，准备好蒸馏水及瓶盖，包装纸等，取100mL小烧杯一只，用50mL量筒量取大量元素，用各母液专用移液管分别吸取微量元素母液，铁盐母液，有机附加物母液，2，4-D母液，6-BA母液。取1000ml烧杯一只，先用量筒取1000mL蒸馏水倒入烧杯中，用记号笔画好液位线，将蒸馏水倒出一半，准确称取8g琼脂倒入烧杯中，置于电炉煮沸，待琼脂完全溶化后，加入10g葡萄糖，充分溶解后，将准备好的含大量元素，微量元素，铁盐，有机附加物和植物生长调节物质的母液混合物倒入烧杯中，用蒸馏水将盛过
5、母液混合物的小烧杯洗三次，一并倒入1000mL烧杯中，加热至沸腾，将烧杯远离火源，并加蒸馏水定容至设定的液位线。4,调节pH：用酸度计测定培养基的pH，用1mol/LHCl或1mol/LNaOH溶液将培养基的pH调整至5.8到6.0。调整时，应用玻璃棒不断搅拌。5,分装：将溶化的培养基趁热均匀的分装于果酱瓶，每瓶30mL培养基，分装3瓶，随即封口。6,重复步骤3到步骤5，步骤3中分别加入20g葡萄糖，30g葡萄糖，40g葡萄糖，10g蔗糖，20g蔗糖，30g蔗糖，40g蔗糖。7,含有每个浓度的糖的
6、培养基分装三个果酱瓶。一共24个果酱瓶。8,将分装好的培养基及用报纸包扎好的剪刀，镊子，解剖刀，含有滤纸的培养皿和果酱瓶装蒸馏水等，置于高压蒸汽灭菌锅中灭菌，灭菌条件为温度121℃，压力为1.1Kg/cm2,灭菌时间20min。9,对外植体进行消毒，接种：（1）准备工作，接种前，用75%乙醇棉球擦拭超净工作台台面，将培养基，无菌水及接种用具，废液杯等放入超净工作台台面适当的位置，打开超净工作台紫外灯，照射30min后关闭，然后打开风机，10min后，再打开日光灯进行无菌操作。（2）外植体表面消毒与
7、整理，将马铃薯块茎在自来水下冲洗干净，用小刀切取块茎芽眼部位，置于50mL烧杯中，用75%乙醇浸泡30s后，立刻除去乙醇，在超净工作台上，在烧杯中加入含有1到2滴吐温20的0.1%氯化汞溶液，浸泡10min，倒去消毒液，用无菌水洗三次，将马铃薯块茎置于经灭菌处理过的垫有无菌滤纸的培养皿中，使用镊子和解剖刀将马铃薯切成小块。（3）接种，在酒精灯上方，左手握住果酱瓶，右手打开瓶盖，将瓶盖朝上置于台面，右手用镊子将马铃薯块茎平放于培养基表面。（4）培养与观察，将接种后的培养瓶置于组织培养室内，有光培养。
8、五，实验结果统计分析蔗糖和葡萄糖的浓度各四个，分别为1%,2%,3%,4%,每个浓度做三个，一共二十四个果酱瓶，每四天观察一次。愈伤组织诱导结果编号每瓶接种数培养条件污染率愈伤组织诱导率愈伤组织状态器官分化与植株再生结果编号愈伤组织来源分化率每个愈伤组织分化芽数分化芽状态污染率
