移液管和可调式移液器的使用与误差分析知识讲解.ppt

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1、移液管和可调式移液器的使用与误差分析主要内容分光光度法的原理吸光度的测量定量分析方法721E分光光度计的操作方法721E分光光度计操作练习分光光度法问题：如何测定溶液中某一种物质的浓度？提示(酸碱滴定、氧化还原、络合滴定、沉淀等)光分析：经历了目视比色、光电比色和分光光度法几个不同阶段。分光光度法：利用溶液对单色光的吸收度来确定溶液中有色物质的含量有色物质溶液颜色的深浅与其浓度有关，浓度愈大，颜色愈深光的基本性质光是一种电磁波，具有波动性和微粒性。波长(λ)、频率(υ)和光速(c)之间的关系是υ=c/λ电磁波谱图可见光区：波长范围约为380~760nm近紫外

2、光：280~380nm图1－1电磁波谱物质对光的选择性吸收问题：歌舞厅内彩色球灯旋转时，你看到物质颜色发生什么变化？结论：物质对光的吸收具有选择性，同一种物质对不同波长的光的吸收能力不同，不同物质对同一波长的光的吸收能力也不同物质所呈现的颜色正是它对不同波长光选择性吸收产生的在人视觉上的反映溶液的颜色当白光通过某一溶液时，该溶液会选择性地吸收某些波长光而让那些未被吸收的光透射过去，溶液呈现透射光的颜色。被吸收的光与透射过去的光称为互补色光物质的颜色吸收光颜色吸收光波长范围(nm)黄绿紫380~435黄蓝435~480橙红绿蓝480~500红紫绿500~560

3、紫黄绿560~580蓝黄580~595绿蓝橙595~650蓝绿红650~760吸收曲线以波长为横坐标，吸光度为纵坐标作图，即可得到一条吸光度随波长变化的曲线，称之为吸收曲线或吸收光谱。光吸收程度最大处的波长，称为最大吸收波长，常用λmax表示。在正常情况下，选用不同浓度的某种溶液，最大吸收波长是固定不变的。图1-2KMnO4溶液的吸收曲线Aλ(nm)应用：可作为物质定性、定量分析的依据入射光Io透射光It反射光散射光吸收光Ia光吸收的基本概念条件：一束平行单色光照射到均匀的、非散射的溶液时I0=Ia+Ir+ItI0为入射光强度Ia为吸收光强度Ir为反射光强度

4、It为透射光强度透光率与吸光度透光率(Transmittance，T)T=It/I0×100％透光率的变化范围：0-100%吸光度(absorbance，A)：透光率的负对数，又称为光密度(Opticaldensity，OD)A=-lgT=lg(I0/It)吸光度的变化范围：0-∞Lambert-Beer定律条件：单色光，稀溶液Lambert定律（1760年）：A=k1LBeer定律（1852年）：A=k2C吸光度（Absorbance）吸光系数液层厚度溶液浓度Lambert-Beer定律：光吸收基本定律吸光系数是物质的特征性常数A=kLC吸光光度法的原理吸

5、光度的测量定量分析方法721E分光光度计的操作方法721E分光光度计操作练习仪器结构：分光光度计光源钨丝灯氢灯或氘灯单色器棱镜光栅吸收池（比色杯、比色皿）玻璃石英检测器光电管光电倍增管显示器检流计数码管显示紫外光可见光紫外光可见光分光光度计的误差Lambert-Beer定律偏离的原因物质浓度太高，改变了被吸收光的折射率仪器的局限性入射光的波长不纯；杂散光的干扰；光电检测器的疲劳现象非对称的化学平衡因其浓度、pH、溶剂和温度的改变，发生解离、缔合、溶剂化和互变异构等化学变化而发生偏离。测量条件的选择入射光波长一般选用被测物质溶液的λmax。可以获得较高的灵敏度

6、控制适当的吸光度测量范围最小误差出现在T%=20-65%(A=0.2-0.7)的范围内选择适当的参比溶液参比溶液的选择1、溶剂参比当被测试液、显色剂及其他试剂在测定波长处都无吸收时，可用纯溶剂(如蒸馏水)作参比溶液。2、试剂参比当被测试液无吸收，而显色剂或其他试剂在测定波长处有吸收时，可用不加试样的“试剂空白”作参比溶液。3、试样参比若被测试液本身在测定波长处有吸收，而显色剂等无吸收时，可用不加显色剂等的“试样空白”作参比溶液。吸光光度法的原理吸光度的测量定量分析方法721E分光光度计的操作方法721E分光光度计操作练习定量分析方法-1标准对照法根据Lamb

7、ert-Beer定律得：As=abcsAx=abcx标准对照法的优缺点定量分析方法-2标准曲线法配制一系列不同的已知浓度的测定物溶液，按测定管同样处理显色，分别读取各管吸光度；以浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。测定时每一个浓度至少应同时做三管（平行管），取其平均值进行标准曲线的绘制。AxCx测定未知溶液的吸光度，直接从标准曲线上查得测定物的浓度。标准曲线法的优缺点定量分析方法-3摩尔吸光系数法摩尔吸光系数ε是溶液浓度为1mol/L，液层厚度为1cm的吸光度。在已知ε的情况下(查文献)，读取测定液厚度为1cm时的吸光度，即可根据下式求得测定液的浓

8、度。C=A/ε摩尔吸光系数法的优缺点吸光光度法的原