实验叶绿素含量的测定复习进程.ppt

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1、实验叶绿素含量的测定植物叶绿素含量测定----丙酮提取法高等植物光合作用过程中利用的光能是通过叶绿体色素(光合色素)吸收的。叶绿体色素由叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素组成。叶绿体色素的提取、分离和测定是研究它们的特性以及在光合中作用的第一步。叶片叶绿素含量与光合作用密切相关，是反眏叶片生理状态的重要指标。在植物光合生理、发育生理和抗性生理研究中经常需要测定叶绿素含量。叶绿素含量也是指导作物栽培生产和选育作物品种的重要指标。叶绿素不溶于水，溶于有机溶剂，可用多种有机溶剂，如丙酮、乙醇或二甲基亚砜等研磨提取或浸泡提取。叶绿色素

2、在特定提取溶液中对特定波长的光有最大吸收，用分光光度计测定在该波长下叶绿素溶液的吸光度(也称为光密度)，再根据叶绿素在该波长下的吸收系数即可计算叶绿素含量。利用分光光计测定叶绿素含量的依据是Lambert-Beer定律，即当一束单色光通过溶液时，溶液的吸光度与溶液的浓度和液层厚度的乘积成正比。其数学表达式为：A=Kbc式中：A为吸光度；K为吸光系数；b为溶液的厚度；c为溶液浓度。叶绿素a、b的丙酮溶液在可见光范围内的最大吸收峰分别位于663、645nm处。叶绿素a和b在663nm处的吸光系数（当溶液厚度为1cm，叶绿素浓度为g·

3、L-1时的吸光度）分别为82.04和9.27；在645nm处的吸光系数分别为16.75和45.60。根据Lambert-Beer定律,叶绿素溶液在663nm和645nm处的吸光度（A663和A645）与溶液中叶绿素a、b和总浓度（a+b）（Ca、Cb、Ca十b，单位为g·L-1），的关系可分别用下列方程式表示：A663=82.04Ca+9.27Cb（1）A645=16.76Ca+45.60Cb（2）Ca=12.7A663—2.59A645(3)Cb=22.9A645—4.67A663(4)Ca十b＝20.3A645—8.04A6

4、63(5)从公式（3）、（4）、（5）可以看出，只要测得叶绿素溶液在663nm和645nm处的吸光度，就可计算出提取液中的叶绿素a、b浓度和叶绿素总浓度（a+b）。所测定材料的单位面积或单位重量的叶绿素含量可按下式进行计算：叶绿素含量（mg·g-1或mg·dm-2）=C×VA×1000式中：C为叶绿素浓度（mg·L-1）或mg·dm-2）；V为提取液总体积（ml）；A为取样鲜重（g）或取样面积（dm-2）。80%丙酮提取液中色素浓度计算公式:(浓度单位：mg/L）Ca=12.21A663–2.81A646Cb=20.13A646

5、–5.03A663CT=Ca+Cb=17.32A646–7.18A663Cx.c=(1000A470–3.27Ca–104Cb)/229植物组织中单位鲜重各色素的含量(mg.g/L)叶绿体色素的含量=色素的浓度(mg.L-1)×提取液体积(L)×稀释倍数样品鲜重(或干重,面积,g或m2)二.试剂与材料2.1试剂：丙酮、石英砂、碳酸钙2.2材料：菠菜的新鲜叶片。2.3仪器与器皿：分光光度计、台秤、剪刀、研钵、移液管、漏斗、大试管叶片洗净、吸干、去大叶脉↓称0.5g叶用丙酮研磨↓匀浆过滤（用80%丙酮洗研钵及残渣，合并滤液）↓滤液用

6、80%丙酮定容至10mL↓适当稀释后测A645、A663三.实验步骤四.结果计算4.1结果计算C(mg/L)×提取液总量（L）×稀释倍数Chl=(mg/g叶)材料鲜重（g）4.2比较分析不同植物的叶绿素含量差异及同种植物在不同生长环境下Chla/Chlb差异。五.注意事项注意叶绿素一定要提干净，避免造成测定误差叶绿素初提液体积不要太多，以免浪费试剂，如果浓度太高可进行适当稀释注意分光光度计的规范使用六.思考题为什么植物在不同生长环境下其Chl含量有差异？Chla/Chlb有何适应意义？此课件下载可自行编辑修改，仅供参考！感谢您

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