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时间：2018-10-15
《实验四 叶绿素a、b 含量的测定》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、——分光光度法实验四叶绿素含量的测定植物生物学实验（二）一，实验目的与要求掌握叶绿素a、b含量测定的方法；了解叶绿素a、b含量和比值与环境因素之间的关系。二、实验材料与试剂材料不同生境下的植物叶片。试剂80%丙酮、无水CaCO3、石英砂。三、实验原理（一）叶绿体色素的组成：1.叶绿素2.类胡萝卜素叶绿素a叶绿素b胡萝卜素叶黄素3:1(阳生)2:1(阴生)2：13：1（二）、叶绿素a、b的结构式与化学性质叶绿素的化学性质：亲脂性>亲水性不溶于水，而溶于有机溶剂，故可用乙醇、丙酮等有机溶剂提取。叶绿素a、b的光吸收总和在645nm和663nm处各有一峰值
2、。（三）、叶绿素a、b的吸收光谱Lambert-beer定律：A=nCLn=摩尔消光系数；C=溶液浓度；L=比色杯内径。吸光度的加和性：混合液在某一波长下的总吸光度就等于各组分在相应波长下吸光度的总和。四、实验步骤提取：叶片洗净、吸干、称重后于研钵中加入5mL80%丙酮、少许石英砂和碳酸钙，研磨匀浆后过滤，再用5mL80%丙酮冲洗滤渣，定容到10mL，混匀；测定：充分过滤后，以80%丙酮调零，测定叶绿素提取液在645nm和663nm处的光吸收值。计算：叶绿素a：C=12.21A663-2.81A645叶绿素a（mg/gFW)=?叶绿素b：C=20.1
3、3A645-5.03A663叶绿素b（mg/gFW)=?叶绿素a/叶绿素b=?五、思考题：1.用无水乙醇或无水丙酮提取干燥材料中的叶绿体色素，对结果会有何影响？为什么？2.研磨提取叶绿素时，为何要加入CaCO3？3.你测定的叶绿素a、b比值符合理论值吗？如果不符合，为什么？
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